3位或4位取代7-羟基香豆素的合成研究

第４１卷第１期　广州化工　Ｖｏ１．４１　Ｎｏ．１　２０１３年１月　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｊａｎｕａｒｙ．２０１３　３位或４位取代７一羟基香豆素的合成研究　黄志平，樊启平，田兴涛，向玉联，张鸣　（防化学院，北京１０２２０５）　摘　要：香豆素类化合物是重要的荧光材料，具有苯并吡喃酮环状结构，环上取代基对荧光性质具有重要影响。本文以　Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应和Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反应合成了三个３位或４位取代７一羟基香豆素，并优化了反应条件，反应快速，操作简便，产品收　率较高。　关键词：合成；７一羟基香豆素；Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应；Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反应　中图分类号：ＴＱ９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—９６７７（２０１３）Ｏｌ一００６５—０３　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　３——ｏｒ　４—－Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　７——Ｈｙｄｒｏｘｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ　ＨＵＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｐｉｎｇ，ＦＡＮ　Ｑｉ—ｐｉｎｇ，ＴＩＡＮ　Ｘｉｎｇ—ｔａｏ，ＸＩＡＮＧ　Ｙｕ—ｌｉａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｍ　ｇ　（１０４８　Ｐ．０．Ｂｏｘ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｅｆｅｎｓｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０５，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｕｍａｒｉｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｉｎｇ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｂｅｎｚｏｐｙｒｏｎｅ，ｗｅｒｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｃａｎｄｉ—　ｄａｔｅｓ．Ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｉｎｇ　ｈａｄ　ｇｒｅａｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｔｈｒｅｅ　３一ｏｒ　４一ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　７一　ｈｙｄｒｏｘｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｂｙ　Ｐｅｃｈｍａｎｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉ—　ｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｏｆ　ｓｈｏｒｔ　ｔｉｍｅ，ｓｉｍｐｌｅ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ｙｉｅｌｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；７一ｈｙｄｒｏｘｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ；Ｐｅｃｈｍａｎｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ；Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　香豆素类化合物具有苯并吡喃酮母核，在自然界中分布广　泛，是天然产物中重要的一类化合物，具有抗菌、消炎、抗　１　实验部分　凝、抗癌及抗肿瘤等多种生物活性　Ｉ２　，常用于合成医药中间　体。香豆素类衍生物还具有优异的光学性质　Ｉ４　，如具有合适　１．１　主要试剂和仪器　的最大激发、发射波长，足够大的Ｓｔｏｋｅｓ位移，较高的荧光量　问苯二酚、２，４一二羟基苯甲醛、乙酰乙酸乙酯、苯甲酰　子产率，可以有效地降低细胞组分和生理液体的背景荧光，避　乙酸乙酯和丙二酸二乙酯，分析纯，购自Ａｌｆａ　Ａｅｓａｒ试剂公司；　免激发光谱和发射光谱的重叠，可用于低浓度检测等，常用于　其他试剂均为分析纯。薄层层析硅胶板，山东烟台江友硅胶开　制作荧光染料和荧光探针物质　Ｊ。其合成和性质的研究一直　发有限公司。　受到关注。香豆素类化合物的基本结构苯并吡喃酮是没有荧光　气相色谱一质谱联用仪，美国安捷伦分析仪器公司；快速　的无色物质，但如果在７位上引入给电子基团，３或４位上引　制备色谱，瑞典Ｂｉｏｔａｇｅ；ＺＦ—Ｉ型三用紫外分析仪，上海优浦　入吸电子基团后，形成推一拉电子体系，便得到强荧光物　科学仪器有限公司；ＷＢＦＹ２０１微波化学反应器，中国巩义市予　质　Ｊ。本文采用Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应和Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反应合成了三个　华仪器有限公司。　香豆素类化合物，分别为４一苯基一７一羟基香豆素、３一乙酰　１．２合成步骤　基一７一羟基香豆素和３一乙氧羰基一７一羟基香豆素，希望通　１．２．１　４一苯基一７一羟基香豆素（１）的合成　过３位或４位引入不同吸电子基团，使其表现出不同荧光性　向圆底烧瓶中加入４．４０　ｇ（４０．０　ｍｍｏ１）问苯二酚、１１．５　ｇ　质，用于荧光探针物质的研究。合成路线如下：　（６０．０　ｍｍｏ１）苯甲酰乙酸乙酯和０．５５　ｇ一水硫酸氢钠　（４．０　ｍｍｏ１），混合均匀，置于微波化学反应器中，装上回流装　“　。Ｈ　Ｈ　０　置，在功率为４００　Ｗ的条件下间歇式加热，ＴＬＣ监测反应进　程，加热８　ｍｉｎ后，问苯二酚消失，停止微波加热。冷却后，　向反应瓶中加入８Ｏ　ｍＬ冰水，搅拌，并用超声波分散，析出大　“　＾量块状固体，抽滤除水，然后用９５％乙醇重结晶，得６．６２　ｇ深　㈣　绿色固体，产率为６５．３％。ＧＣ—ＭＳ分析表明产物为４一苯基　一７一羟基香豆素，ＭＳ（ｎＶｚ）：２３８．２（Ｍ　，９２．１％），２１０．１　（１００％），１８１．２（３４．２％），１５２．１（２６．３％），７６．１（９．２％）。　Ｒ　（０．５５，乙酸乙酯：石油醚＝２：１）。　作者简介：黄志平（１９７４一），男，副教授，主要从事有机化学教学和研究。　广扫描１７３２（Ｉ　５　９７８分】：２０１　２０３１　５０２　Ｄ＼ｄｄＩ　ｌｓ　２１０　ｌ　州化Ｔ　２８　１　１４　１７０到ｌ４　２４０分钟的甲均值：２０１２０３３００１　１　ｙ‘Ｊ　ａ　∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞０　瑚㈣㈣　㈣㈣　∞　＊　ｌＯ５　Ｏ　１　．２８３ｌ　５０　０４０４　３　４８４　ｌ５４２．０　５９１．１　６５３　Ｊ　．Ｊ　．１．　１　．　５　Ｉ４０４　９４７５　７５２９　ｏ５７７．６６３９　４６９５　０　５０　１Ｏ０　１５０　２００　２５０　３００　３５０　４００　４５０　５００　５５０　６００　６５０　７００　０　５０　１００　１５０２００２５０　３００３５０４００４５０５００５５０６００６５０７００　ｍ／ｚ　图１　４一苯基一７一羟基香豆素的ＭＳ图　１．２．２　３一乙酰基一７一羟基香豆素（２）的合成　向　底烧瓶中加入５．５２　ｇ（４０．０　ｍｍｏ１）２，４一二羟基苯甲　醛、７．８０　ｇ（６０．０　ｍｍｏ１）乙酰乙酸乙酯和３０　ｍＬ无水乙醇，再加　入０．３　ｒｎＬ六氢吡啶，混合均匀。将反应液置于微波化学反应　器中，装上回流装置，在功率为４００　Ｗ的条件下间歇式加热，　ＴＬＣ监测反应进程，加热５　ｍｉｎ后，２，４一二羟基苯甲醛消失，　停止微波加热。待反应液自然冷却后，反应瓶中析出大量固　体，抽滤，用冰的无水乙醇洗涤两次，自然晾干，得６．９３　ｇ浅　黄绿色粉末［古１体，产率为８５．Ｏ％。ＧＣ—ＭＳ分析表明产物为　３一乙酰基一７一羟基香豆素，ＭＳ（ｎｒ／ｚ）：２０４．２（Ｍ　，４４．４％），　１８９．０（１００％），１６１．０（１　１．１％）．１０５．１（１７．８％）；Ｒ　（０．５５．　乙酸乙酯：石油醚＝２：１）。　十Ｉ描１　３３９ｆ１　２　９４１分）．２０Ｉ２０３１５０１．Ｄ＼ｄａ　ｍｓ　１　８９　０　４５００００　４０００００　３５０（）００　３０００００　２５００００　２０００００　ｌ　５００００　１０００００　ｌ０５　ｌ　５００００　０　１：　４　９　３５４．９　４０４　９　４５５　４　５４２　２　６２ｌ　ｌ　６７４　０　５０　１００　１５０２００２５０　３００　３５０４００４５０　５００　５５０６００６５０７００　ｍ／ｚ　图２　３一乙酰基一７一羟基香豆素的ＭＳ图　１．２．３　３一乙氧羰基一７一羟基香豆素（３）的合成　向圆底烧瓶中加入５．５２　ｇ（４０．０　ｍｍｏ１）２，４一二羟基苯甲　醛、１１．５　ｇ（６０．０　ｍｍｏ１）丙二酸二乙酯和３０　ｍＬ无水乙醇，再加　入０．３　ｍＬ六氢吡啶，混合均匀。将反应液置于微波化学反应　器中，装上回流装置，在功率为４００Ｗ的条件下间歇式加热，　ＴＬＣ监测反应进程，加热４　ｍｉｎ后，２，４一二羟基苯甲醛消失，　停止微波加热。待反应液自然冷却后，反应瓶中析出大量固　体，抽滤，用冰的无水乙醇洗涤两次，自然晾干，得８．２９　ｇ浅　黄色粉末固体，产率为８８．６％。ＧＣ—ＭＳ分析表明产物为３一　乙氧羰基一７一羟基香豆素，ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３４．２（Ｍ　，４４．０％），　ｌ８９．０（１００％），１５２．０（８３．３％），１３５．２（２５．０％），１０５．１　（３０．９％）；Ｒ　（０．４５，乙酸乙酯：石油醚＝３：２）。　ｍ／ｚ　图３　３一乙氧羰基一７一羟基香豆素的ＭＳ图　２结果与讨论　２．１　反应原理　合成香豆素类化合物的方法主要有Ｐｅｒｋｉｎ反应、ｌ￣ｌｏｅｖｅｎａｇｅｌ　反应和Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应等　。４一苯基一７一羟基香　素的母体环Ｌ　４位和７位取代，可以从问苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯通过Ｐｅｃｈｒｎａｎｎ　反应得到，其原理是问苯二酚与苯甲酰乙酸乙酯在酸性催化和加　热下，首先发生酯交换，然后再发生分子内的亲电进攻成环反应，　最终失水得到产物　…。３一乙酰基一７一羟基香豆素和３一乙氧羰基　一７一羟基香豆素的母体环上３位和７位取代，可以由２，４一二羟暴　苯甲醛－ｈＮ与乙酰乙酸乙酯和丙二酸二乙酯通过Ｋｎｏｅ＇ｖｅｎａｇｅｌ反应　得到，其原理是２，４一二羟基苯甲醛首先分别与乙酰乙酸乙酯和丙　二酸二乙酯发生酯交换，然后乙酰乙酸乙酯和丙二酸二乙酯的活　泼亚甲基与２，４一二羟基苯甲醛的醛基在弱碱作用下发生亲核加成　反应实现成环，并失水得到产物　。　２．２反应条件的优化　对于４一苯基一７一羟基香豆素的合成，类似于４一甲基一７　羟基香豆素的合成，反应原料中间苯二酚为固相，苯甲酰乙　酸乙酯为液相，并且间苯二酚易溶于苯甲酰乙酸乙酯，Ｌ大Ｊ此此　反应可不加溶剂　，而采用过量的乙酰乙酸乙酯为溶剂。反应　对加热条件比较敏感，同时，催化酸的选择对反应的进行与产　品提纯有较大影响。加热条件选择了微波加热。实验表明，常规　加热，反应过程中有固体析出，通常需要２　ｈ以上，反应才能完　全，而微波加热反应，反应过程中加热效率较高　，崮体处丁　熔化状态，反应相对均相，ＴＬＣ检测显示，８　ｍｉｎ反应完全，时　间大大缩短，产物纯度较好，提高了反应效率。文献报道采　【｝ｉ浓　硫酸、硫酸氢钠等强酸作为Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应的催化剂。本文选用　一水硫酸氢钠　，反应结束后，向反应体系中加入冰水，…　水　硫酸氢钠溶于水中，产物不溶于水，通过过滤操作，即可得到纯　度较高的产品，后处理简便。而采用浓硫酸作催化剂，南丁浓硫　酸的脱水作用，导致副反应较多，分离纯化困难。　对于３一乙酰基一７一羟基香豆素和３一乙氧羰基一７一羟基　香豆素的合成，用２，４一二羟基苯甲醛和含有活泼亚　基的化　合物乙酰乙酸乙酯或丙二酸二乙酯作反应物，以乙醇作溶齐ＩＪ，　哌啶作为弱碱催化剂。活泼亚甲基化合物的用量、乙醇溶剂的　多少、催化剂种类与用量、加热方式，以及反应液冷却速度，　对反应进行和产品纯化都有不同程度的影响…。实验表明，乙　酰乙酸乙酯或丙二酸二乙酯用量为２，４一二羟基苯甲醛１．５俯　或更多时，反应比较完全。乙醇溶剂斤ｊ量不能太多，否则，，　：　物不能析出或析　不完全，造成产物损失。如果乙醇较多，可　第４１卷第１期　黄志平等：３位或４位取代７一羟基香豆素的合成研究　６７　考虑在反应完成后除去部分乙醇。实验发现，冷却速度的控制　对产品析出和纯化影响较大。冷却速度要慢，在常温条件下自　然冷却，产品会慢慢析出，得到产品较纯。如果将反应液直接　倒入冰水中快速冷却，溶液呈浑浊状，不易澄清、分离，且产　［３］　陈康裕．新型香豆素类荧光化合物和荧光探针的合成及其性质研　究［Ｄ］．西安：西北大学，２０１０．　杜阳吉，等．荧光香豆素衍生物的合成及其光电性能　【４］　郑伟华，王辉，研究［Ｊ］．化学研究与应用，２００９，２１（８）：ｌ１７６一ｌ１８Ｏ．　［５］　邹碧群，张业，覃雯，等．超声波辅助下合成香豆素一３一羧酸及其　对有色金属的离子识别［Ｊ］．桂林师范高等专科学校学报，２０１０，２４　（３）：１９０—１９３．　ｋ　Ｌｅｅ，Ｈａｅ—ＪｏＫｉｍ，Ｇｕｎ—ＨｅｅＫｉｍ，Ｉｎｊａｅ　Ｓｈｉｎ　ａｎｄ　Ｊｏｎｇ　［６］　Ｋｙｕｎｇ—Ｓｉ—物呈黄色，使产物纯度降低。微波加热方式比常规加热，同样　也大大缩短了反应的时间，提高了反应效率　。　３　结论　Ｉｎ　Ｈｏｎｇ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　Ｃｈｅｍｏｄｏｓｉｍｅｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｙａ—　合成了４一苯基一７一羟基香豆素、３一乙酰基一７一羟基香　豆素和３一乙氧羰基一７一羟基香豆素三个香豆素衍生物，为获　得具有不同荧光性质的香豆素化合物奠定了基础。对反应条件　进行了优化，合成方法简便快速，收率较高。所得产物溶于甲　醇中，在太阳光下能看到明显不同的荧光现象，初步表明具有　不同的荧光性质。　参考文献　Ｂｈｕｍｉｋａ　Ｔｈａｔｉ，Ａｎｄｙ　Ｎｏｂｌｅ，Ｂｅｒｎａｄｅｔｔｅ　Ｓ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｅｖｅｎｔｓ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　６——ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ—－３—・ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｏｓｉｌｖｅｒ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｍａｌｉｇ－　ｎｉｄｅ　ｉｎ　Ｗａｔｅｒ［Ｊ］．ＯＲＧＡＮＩＣ　ＬＥＴＹＥＲＳ，２００８，１０（１）：４９—５１．　［７］　熊敏秋，席海涛，付永胜，等．新型香豆素荧光探针的合成及其对三　聚氰胺的识别性能研究［Ｊ］．有机化学，２０１０，３０（６）：９０８—９１１．　［８］　彭梦姣，郭媛，杨栋，等．香豆素类亚硫酸氢根离子探针的合成及荧　光性质研究［Ｊ］．精细化工，２０１ｌ，２８（３）：３０８—３１２．　［９］　徐小波，关启明，颜继忠．香豆素类化合物合成方法最新研究进展　［Ｊ］．化学工程与装备，２００８（２）：８３—８７．　［１０］　黄维，董小萍，邵培，等．新型４一羟基香豆素衍生物的合成［Ｊ］．合　成化学，２０１０，ｌ８（２）：２３２—２３４。　张驰，杜娟．香豆素一３一甲酸乙酯的简便合成方法［Ｊ］．实验技术　与管理，２０１０，２７（６）：４３—４５．　［１２］　杨金会，计从斌，赵艳敏．一水硫酸氢钠无溶剂催化合成４一甲基香　豆素［Ｊ］．有机化学，２００８，２８（１０）：１７４０—１７４３．　［１３］　张业，邹碧群，王凯．微波辐射辅助合成４一甲基香豆素衍生物［Ｊ］．　化学试剂，２０１０，３２（９）：７８７—７８９．　ｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，２５０（１）：１２８—１３９．　ｔ　Ｒ　Ｔ，Ａｌｌａｎ　Ｒ　Ｓ，Ｂｒｉａｎ　Ｊ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｕｍａｆｎｓ　ｉｎ　ｐｏｌｙｍｅｒｓ：ｆｒｏｍ　［２］　Ｓｃｏｔｌｉｇｈｔ　ｈａｒｖｅｓｔｉｎｇ　ｔｏ　ｐｈｏｔｏ—ｃｒｏｓｓ—ｌｉｎｋａｂｌｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓｃａｆｆｏｌｄｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ．　Ｒｅｖ．，２００４，１０４（６）：３０５９—３０７８．　（上接第４７页）　镀膜层厚度也是一个不可忽略的影响因素。镀膜层太薄，　导电性差，可能与样品粘结不牢；太厚，则会掩盖样品的真实　形貌。通常镀膜时间控制在３～５　ｍｉｎ，膜厚在１０　ｎｍ左右（样　品不同，厚度不同）。样品进行导电处理后，即可进行电镜观　测。　［３］　Ａｇｎｉｅｓｚｋａ　Ｄｕｄｋｉｅｗｉｃｚ，Ｋａｒｅｎ　Ｔｉｅｄｅ，Ｋａｔｒｉｎ　Ｌｏｅｓｃｈｎｅｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃ—　ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｂｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　ｆ　Ｊ］．ＴｒＡＣ　Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，３０（１）：２８—４３．　［４］　Ｇ．Ｓａｌｖｉａｔｉ，Ｌ．Ｌａｚｚａｒｉｎｉ，Ｔ．Ｓｅｋｉｇｕｅｈ，ｅｔ　ａ１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｅｍｉｃｏｎ－　ｄｕｅｔｏｒｓ　ｂｙ　Ｓｃａｎｎｉｎｇ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｊ］．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎ—　ｓｉｖｅ　Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１　１，４：３０８—３５６．　３　结语　［５］郭素枝．扫描电镜技术及其应用［Ｍ］．厦门：厦门大学出版社，　２００６：７６—７８．　随着技术的发展和普及，扫描电子显微镜已经从基础研究　走向了生产测试。ＳＥＭ不仅应用于材料学，还应用于电子学、　医学和生物学等领域，也不仅是对样品的表面形貌进行观测，　还可实现对相组织和晶体结构进行分析。ＳＥＭ用途广泛、功能　强大，但制样的好坏将直接影响测试结果的准确性。对不同样　品选择合适的制样方法，以保证测试结果的准确度和精密度，　是一项基础而又必需掌握的技能，这也是扫描电镜能充分发挥　功能的前提。　参考文献　Ｃ．Ｍ．Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｓ．Ｍｉｔｒａ．Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｆｏｒ　Ｓａｍｐｌｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｓａｍｐｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｓａｍｐｌｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，２０１２，２：３８９—４１８．　［６］　张大同．扫描电镜与能谱仪分析技术［Ｍ］．广州：华南理工大学出　版社，２００９：１４２—１４３．　［７］　王醒东，林中山，张立永，等．扫描电子显微镜的结构及对样品的制　备［Ｊ］．广州化工，２０１２，４０（１９）：２８—３０．　［８］Ｇ．Ｔｏｐａｌｏｖ，Ｇ．Ｇａｎｓｋｅ，Ｅ．Ｌｅｆｔｅｒｏｖａ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒ－　ｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｉｎ　Ｐｔ—Ｉｒ　ｉｆｌｍｓ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　ｂｙ　ｄｃ　ｍａｇｎｅｔｒｏｎ　ＣＯ—ｓｐｕｔｔｅｉｒｎｇ［Ｊ］．　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｙｄｒｏｇｅｎ　Ｅｎｅｒｙ，２０１１，２３（３６）：１５４３７一　ｇｌ５４４５．　［９］　Ｍｉａｏｍｉａｏ　Ｌｉ，Ｆａｎｇｇａｏ　Ｃｈａｎｇ，Ｃｈａｏ　Ｌｉ，ｅｔ　ａ１．ＣＩＳ　ａｎｄ　ＣＩＧＳ　ｔｈｉｎ　ｆｉｌｍｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｍａｇｎｅｔｒｏｎ　ｓｐｕｔｔｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｄｉａ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１２，　２７：１２—１９．　［１０］Ｅ．Ｇｒｉｇｏｒｅ，Ｃ．Ｒｕｓｅｔ，Ｃ．Ｌｕｃｕｌｅｓｃｕ．Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ＶＮ——ＶＣＮ——ＶＣ　ｃｏａｔｉｎｇｓ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　ｂｙ　ａ　ｈｉｇｈ　ｅｎｅｒｙ　ｉｇｏｎ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｍａｇ—　　Ｒａｍａｙａｋｅ，Ｄａｒｙｌ　Ｃ．Ｊｏｙｃｅ，Ｒｉｃｈａｒｄ　Ｉ．Ｗｅｂｂ．Ａ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　［２］　Ｋａｍａｎｉｓａｍｐｌｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ｅｘａｍｉｎａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｘｙｌｅｍ—ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｂｉｏｆｉｌｍ　ｏｎ　ｃｕｔ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｎｄ　ｆｏｌｉａｇｅ　ｎｅｔｒｏｎ　ｓｐｕｔｔｅｒｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｄ　Ｃｏａｔｉｎｇｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１　１，　２０５（２）：￥２９一￥３２．　［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｈｕｒａｅ，２０１２，１４０：１２—１８．