HPLC法测定阿日希·阿嘎如-8味散中羟基红花黄色素A的含量

包１０　头医学院学报　２０１４年第３Ｏ卷第１期　Ｖｏ１．３Ｏ　Ｎｏ．１　２０１４　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂａｏｔｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ＨＰＬＣ法测定阿日希・阿嘎如一８昧散中羟基红花黄色素Ａ的含量　哈斯巴特尔　邹德志　李振华　（１．内蒙古阿拉善盟蒙医医院，内蒙古阿拉善盟７５０３００；２．包头医学院）　摘要　目的：探讨用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定蒙药传统方剂阿日希・阿嘎如一８味散中羟基红花黄色素Ａ含　量的方法。方法：采用高效液相色谱法测定阿Ｅｔ希・阿嘎如一８味散中羟基红花黄色素Ａ含量。以Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ—ＳＰ柱　为固定相，０．７％磷酸溶液一甲醇一乙睛（７２：２６：２）为流动相，检测波长为４０３　ｎｍ，流速为１　ｍＬ／ｍｉｎ。结果：回归方程为　ｙ＝３５２　１３１Ｘ一３　２４２，ｒ＝０．９９９６。羟基红花黄色素Ａ在０．１１２—０．５６０　Ｉｘｇ范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率　为１０３．１５％，ＲＳＤ＝０．７６％。结论：本方法简便准确，重复性好，可用于阿日希・阿嘎如一８味散中羟基红花黄色素Ａ　的含量测定。　关键词阿日希・阿嘎如一８味散；羟基红花黄色素Ａ；高效液相色谱　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｌｌｏｒ　Ｙｅｌｌｏｗ　Ａ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｒｉｘｉ・Ａｇａｒｕ一８　ｂｙ　ＨＰＬＣ　Ｈａｓｉｂａｔｅｅｒ　，ＺＯＵ　Ｄｅｚｈｉ　，ＬＩ　Ｚｈｅｎｈｕａ２　（１．Ａｌａｓｈａｎ　Ｌｅａｇｕｅ　Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ａｌａｓｈａｎ　７５０３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｂａｏｔｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｌｆｏｒ　ｙｅｌｌｏｗ　Ａ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｒｉｘｉ‘Ａｇａｒｕ一　８　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｌｆｏｒ　ｙｅｌｌｏｗ　Ａ　ｉｎ　Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｒｉｘｉ・Ａｇａｒｕ一８　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ　ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ—ＳＰ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　０．７％Ｈ３ＰＯ４一ＭｅＯＨ—Ｃ２Ｈ３Ｎ（７２：２６：２）．　Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｈ　ｗａｓ　４０３　ｎｍ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１　ｍｌ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｆｌｏｒ　ｙｅｌｌｏｗ　Ａ　ｗａｓ　０．１ｌ２一Ｏ．５６　ｔｘｇ　ｗｉｔｈ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｏｆｌ，＝３５２　１３１Ｘ一３　２４２（ｒ＝０．９９９６）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　Ｗａｓ　１０３．１５％，ＲＳＤ＝　０．７６％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｆｌｏｒ　ｙｅｌｌｏｗ　Ａ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｆａｓｔ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ　ｓｈｏｗｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ａｒｉｘｉ・Ａｇａｒｕ一８；Ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｌｆｏｒ　Ｙｅｌｌｏｗ　Ａ；ＨＰＬＣ　蒙医药拥有２　０００多年悠久的历史，是蒙古族人　民与自然和疾病长期斗争实践中创造积累和精选出来　的、有其独特风格的经验结晶，是蒙古族文化的重要组　成部分　卜　。但因在药效学基础、质量标准、生产工艺　及安全性评价等方面的研究比较落后，蒙药迄今为止　还没有真正进入国内外医药主流市场　Ｊ。在当今全　球化迅猛发展的时代，经济上处于劣势的民族的医药　文化正受到巨大的冲击，许多古老的医药文化正在消　痛，心悸气短，咳嗽，为蒙医常用药　。但目前有关阿　日希・阿嘎如一８味散的研究较少，更缺少系统科学　的质量评价体系，无法保证人民用药安全。本实验首　次采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定蒙药阿日希・阿　嘎如一８味散中羟基红花黄色素Ａ的含量，为进一步　完善与制定阿日希・阿嘎如一８味散质量标准奠定基　础。　１仪器与试药　失。因此应该不断加大对蒙医药文化的保护力度，系　统整理与挖掘传统蒙医药文化，同时还应利用现代化　先进技术加快具有民族特色的蒙药开发研究步伐，推　进蒙医药现代化进程。　阿Ｅｌ希・阿嘎如一８味散，别名让・阿嘎如一８，　１．１仪器岛津ＬＣ一２０ＡＴ泵；岛津ＳＰＤ一２０Ａ检测　器；岛津ＣＴＯ—ＩＯＡＳ色谱工作站；ＦＡ１１０４型电子分析　天平；ＭＥＴＩ＇ＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ—ＸＳ２０５型电子分析天平。　１．２试剂与试药羟基红花黄色素对照品（１１１６３７—　２０１１０６），由中国药品生物制品检定所提供；供试品三　批（批号分别为２０１１０３１１—０１５、２０１　１０４１２—０４１、　２０１００７１９—０６４），由阿拉善盟蒙医医院制剂室提供；甲　来源于《蒙医传统验方》，由山沉香、白檀香、广枣、红　花、肉豆蔻、天竺黄、北沙参、紫檀香八昧药材组成，具　有清肺止咳、平喘、缓解胸闷刺痛的作用，用于胸闷刺　醇、乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。　Ｖｏ１．３０　Ｎｏ．１　２０１４　哈斯巴特尔，等．ＨＰＬＣ法测定阿日希・阿嘎如一８味散中羟基红花黄色素Ａ的含量　ｌ１　２方法和结果　２．１溶液的制备　２．１．１标准品溶液的制备取羟基红花黄色素Ａ对　照品１１．２　ｍｇ，精密称定，置１００　ｍＬ量瓶中，加２５％　甲醇使其溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。　２．１．２样品溶液的制备　取阿日希・阿嘎如一８味　散样品０．４　ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人　２５％甲醇５０　ｍＬ，称定重量，超声处理４０　ｍｉｎ，放冷，再　称定重量，用２５％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，　取续滤液，即为样品待测液。　２．１．３阴性对照溶液的制备按处方比例并以相同　工艺制备的缺红花的阴性对照品，按供试品溶液制备　方法制备。　２．２　色谱条件　色谱柱为Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ　Ｃ１８柱　（２５０　ｍｍ　ｘ　４．６　ｍｍ，５　ｍ）及Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ—ＳＰ柱　（１５０　ｍｉｌｌ×４．６　ｍｍ，５　Ｉ．ｚｍ）；流动相：０．７％磷酸溶液　一甲醇一乙腈（７２：２６：２）；柱温：３０　ｏＣ；检测波长：　４０３　ｎｍ。在此条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性　对照溶液、样品溶液各ｌ０　Ｌ，注入液相色谱仪。结果　表明，理论板数／＂ｔ＞３　０００；Ｒ＞１．５，阴性对照色谱中　在与羟基红花黄色素Ａ对照品以及供试品色谱相对　应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对羟基　红花黄色素Ａ的测定无干扰。具体分离效果见图１。　。．。Ｈ　潮｝。ｌ‘　．．　｝　。Ｈ　汪．一．Ｌ　．螂　Ｈ●　，　ｌ　图１阿日希・阿嘎如一８昧散样品及标准品ＨＰＬＣ色谱图　Ａ：阿日希・阿嘎如一８味散空白溶液ＨＰＬＣ图；Ｂ：羟基红花黄色素　Ａ标准品ＨＰＬＣ图；ｃ：阿１３希・阿嘎如一８昧散样品ＨＰＬＣ图；１：羟　基红花黄色素Ａ色谱峰　２．３方法学考察　２．３．１线性关系考察取羟基红花黄色素Ａ标准品　溶液，在２．２色谱条件下，分别进样１、２、３、４、５　，以　峰面积和进样量（质量）进行回归分析，回归方程为　Ｙ＝３５２　１３１Ｘ一３　２４２，ｒ＝０．９９９　６。结果表明：羟基　红花黄色素Ａ在０．１１２—０．５６０　Ｉ．ｚｇ范围内呈良好的线　性关系。　２．３．２稳定性试验取同一份供试品溶液，在２．２色　谱条件下，分别于０、２、４、８、ｌ２、２４　ｈ，精密吸取１０　Ｌ，　注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，结果　ＲＳＤ为１．１１％，表明供试品在２４　ｈ内稳定性良好。　２．３．３重复性试验取同一份样品（自制小样）６份，　各约０，８　ｇ，精密称定，按２．１．２项下进行溶液的制备，　在２．２色谱条件分别进样ｌ０　，将峰面积值代入标　准曲线，进而计算含量，结果表明羟基红花黄色素Ａ　的平均含量为０．６９　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ（％）＝１．０，表明该含　量测定方法具有良好的重复性。　２．３．４加样回收试验取供试品（自￥１Ｊ／Ｊ，样，羟基红花　黄色素Ａ含量０．６８７　４　ｍｇ／ｇ）９份，各约０．８　ｇ，精密称　定，其中１、２、３号各精密加入用２５％甲醇配制的羟基　红花黄色素Ａ对照品溶液（羟基红花黄色素Ａ浓度为　０．１　１２　０　ｍｓ／ｍＬ）１　ｍＬ，４、５、６号各精密加入上述对照　品溶液２　ｍＬ，７、８、９号各精密加入上述对照品溶液　３　ｍＬ，测定每份供试品含量，计算加样回收率，结果羟　基红花黄色素Ａ的加样回收率平均值为１０３．１５％，　ＲＳＤ为０．７６％，表明方法准确度高。具体数据见表　ｉ　表１加样回收试验结果　２．４样品含量测定精密吸取对照品溶液与供试品　溶液各１Ｏ　Ｌ，进样，照上述色谱条件分离、测定，以外　标法计算样品含量，结果见表２。　表２样品中羟基红花黄色素Ａ含量测定结果（ｘ　４－ｓ，ｎ＝３）　样品批号　含量（ｍｇ／ｇ）　２０ＩＩＯ３【Ｉ一０１５　０　３７７　８±０．００２　３　２叭ｌｏ４ｌ２—０４ｌ　０．４７０　５±０．００３　３　２ＯｌＯｏ７ｌ９—０６４　０　Ｉ５０　７±０　００Ｏ　８　３讨论　本实验采用高效液相色谱法测定阿日希・阿嘎如　一８中羟基红花黄色素Ａ含量，其中流动相的选择参　照《中国药典））２０１０年版一部“红花”项下流动相比例　进行流动相条件摸索，样品保留时间太短，经调整流动　相比例至０．７％磷酸溶液：甲醇：乙腈为７２：２６：２时，　羟基红花黄色素Ａ与其他成分达到较好的分离度，并　ｌ２　包头医学院学报　（１）：３２—３４．　Ｖ０１．３０　Ｎｏ．１　２Ｏ１４　具有较好的保留时间。实验柱温采用３Ｏ　ｃＣ，可降低流　动相粘度，降低柱压。检测波长的选择，也是参照《中　［２］　周桂坤，关金凤．蒙药的历史渊源、研究现状及展望［Ｊ］．　中国民族民间医药杂志，２００７，８（１）：６—９．　国药典》２０１０年版一部“红花”项下的规定，选用　４０３　ｎｍ作为检测波长　。　［３］罗布桑．蒙药学［Ｍ］．北京：民族出版社，１９８９：３２１．　［４］　毕力夫，吴岩．蒙药材质量标准化研究的现状与意义［Ｊ］．　内蒙古医学院学报，２００８，３０（１）：３６—３８．　［５］　白清云　中国医学百科全书蒙医学（上）［Ｍ］．赤峰：内蒙　古科学技术出版社。１９８６：７０７．　总之，ＨＰＬＣ测定蒙药阿日希・阿嘎如一８味散中　羟基红花黄色素Ａ的含量方法简便、快捷、准确、重复　性和稳定性好，可用于阿日希・阿嘎如一８味散质量　检测的标准。　参考文献　［１］　那生桑．蒙药学概况［Ｊ］．中国民族医药杂志，２００７，１３　［６］　李燕，赵燕宜，于海平，等．中华人民共和国药典［Ｍ］．　２０１０版．北京：医药科技出版社，２０１０：１４１．　（收稿日期：２０１３—１１—１０）　（上接第９页）　据Ｈａａｇｅ等　报道，头静脉一桡动脉内瘘５５％～　７５％的狭窄病变位于ＡＶＦ吻合口及其附近，仅２５％　的狭窄病变位于流出道静脉。本文患者经超声诊断属　狭窄在流出道附近，浅静脉主干缺乏足够的侧支导致　浅静脉闭塞。血栓形成是其最常见的并发症。患者中　心静脉狭窄或堵塞，由于胸壁、肩颈部大量的侧支的开　养均得到明显的改善。　参考文献　［１］　陈文，陈裕感，黄茂芹，等．动静脉内瘘并发肿胀手综合征　３例［Ｊ］．中华肾脏病杂志，１９９７，４（１３）：２２８．　［２］　ｋｕｎｄｕ　Ｓ．Ｃｅｎｔｒａｌ　ｖｅｎｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：　ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，ｅｔｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｖａｓｃ　Ａｃｃｅｓｓ，２０　１０，　ｌ１：１—７．　放以保持ＡＶＦ通畅，因此患肢的肿胀、浅静脉扩张是　其最主要的表现。　本文患者尽管由于反复的颈内静脉、股静脉、锁骨　下静脉插管致患者的内瘘静脉回流不畅，但通过医护　人员的精心护理及诊治，效果明显，使患者及家属从放　［３］Ｈａａｇｅ　Ｐ，Ｇｕｎｔｈｅｒ　ＰＭ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｔｏ　ｍａｉｎｔａｉｎ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ａｃｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｖａｓｃ　Ｅｎｄｏｖａｓｃ　Ｓｕｒｇ，２００６，３２：８４　—８９．　（收稿日期：２０１３－０８—１２）　弃治疗又从新恢复对治疗的信心，现患者的食欲及营