茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制

ＡＣＴＡＥＣＯＬＯＧＩＣＡＳＩＮＩＣＡ

生态学报

Ｖｏｌ．４０，Ｎｏ．７Ａｐｒ．，２０２０

ＤＯＩ：１０．５８４６／ｓｔｘｂ２０１８１２２９２８３６

林熠斌，杨玉瑞，黄荣雪，赵玉莹，何陈铃，魏晓辰，曾任森，宋圆圆．茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制．生态学报，２０２０，４０（７）：２４０７⁃２４１６．

ＬｉｎＹＢ，ＹａｎｇＹＲ，ＨｕａｎｇＲＸ，ＺｈａｏＹＹ，ＨｅＣＬ，ＷｅｉＸＣ，ＺｅｎｇＲＳ，ＳｏｎｇＹＹ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓｉｎｔｏｍａｔｏｐｌａｎｔｓ．ＡｃｔａＥｃｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２０２０，４０（７）：２４０７⁃２４１６．

茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制

林熠斌１，２，杨玉瑞１，３，黄荣雪１，３，赵玉莹１，３，何陈铃１，３，魏晓辰３，曾任森１，３，宋圆圆１，３，∗　

１福建农林大学农学院作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室，福州　３５０００２２福建农林大学生命科学学院，福州　３５０００２

３福建农林大学作物抗性与化学生态学研究所，福州　３５０００２

摘要：丛枝菌根真菌的定殖可以提高寄主植物的抗病性，但机制并不十分清楚。利用番茄茉莉酸信号转导途径前系统素过表达材料３５Ｓ：：ＰＳ、茉莉酸合成突变体ｓｐｒ２、茉莉酸信号识别突变体ｊａｉ１及其野生型ＣＭ４个不同基因型材料，分别在根系接种丛枝菌根真菌摩西斗管囊霉（Ｆｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ，Ｆｍ），待菌根形成后，在叶片外源喷施１０ｍＬ０．５μｍｏｌ／Ｌ茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）和接种番茄早疫病病原菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ，Ａｓ），比较不同基因型抗病防御反应以及对早疫病抗性的差异。结果表明：预先接种菌根真菌的ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄，在叶片接种病菌５ｄ和１０ｄ后，其叶片中过氧化物酶（ＰＯＤ）、多酚氧化酶（ＰＰＯ）和脂氧合酶（ＬＯＸ）活性以及丙二烯氧化物环化酶基因（ＡＯＣ）和茉莉酸信号受体基因（ＣＯＩ１）的转录水平显著高于只接种早疫病菌的处理、只接种菌根菌的处理以及未进行任何处理的健康植株，其早疫病发病率和病情指数也显著降低；外源喷施ＭｅＪＡ可增强预先接种菌根菌的ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄植抵抗早疫病的能力。与此同时，对预先接种菌根菌的ｓｐｒ２番茄外源喷施ＭｅＪＡ后接种早疫病菌，其酶活性和基因转录水平显著高于其他４个处理，发病率和病情指数也明显降低。然而，对ｊａｉ１番茄进行ＭｅＪＡ处理不能增强其防御反应和抗病性。可见，丛枝菌根真菌侵染诱导番茄抗早疫病是与茉莉酸信号途径密切相关的。关键词：丛枝菌根真菌；番茄；番茄早疫病；诱导抗病性；茉莉酸信号途径

Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓｉｎｔｏｍａｔｏｐｌａｎｔｓ

ＺＥＮＧＲｅｎｓｅｎ１，３，ＳＯＮＧＹｕａｎｙｕａｎ１，３，∗

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ

ＬＩＮＹｉｂｉｎ１，２，ＹＡＮＧＹｕｒｕｉ１，３，ＨＵＡＮＧＲｏｎｇｘｕｅ１，３，ＺＨＡＯＹｕｙｉｎｇ１，３，ＨＥＣｈｅｎｌｉｎｇ１，３，ＷＥＩＸｉａｏｃｈｅｎ３，

１ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎｆｏｒＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＭｕｌｔｉｐｌｅＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｒｏｐｓ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ

３ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＲｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｃｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｏｏｔｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｐｌａｎｔｓ，ｂｕｔｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｎｏｔｃｌｅａｒ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｔｏｍａｔｏｉｎｃｌｕｄｉｎｇｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄ（ＪＡ）ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｍａｔｏｌｉｎｅ３５Ｓ：：ＰＳ，ＪＡｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｍｕｔａｎｔｓｐｒ２，ＪＡｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｕｔａｎｔｊａｉ１，ａｎｄｗｉｄｅｔｙｐｅＣＭ

（ＳｏｌａｎｕｍｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍＭｉｌｌ．ｃｖＣａｓｔｌｅｍａｒｔ）ｐｌａｎｔｓｔｏｉｎｆｅｃｔｉｏｎｂｙｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔｐａｔｈｏｇｅｎＡｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｒｏｏｔｓｈａｄｂｅｅｎｃｏｌｏｎｉｚｅｄｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ（Ｆｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ，Ｆｍ）ａｎｄｔｈｅｌｅａｖｅｓｈａｄｂｅｅｎ

基金项目：福建省青年拔尖创新人才项目（福建省“海纳百川”高端人才聚集计划２０１６）；福建省“百人计划”人才项目（闽委人才〔２０１５〕０８号）；福建省杰出青年科学基金项目（２０１７Ｊ０６０１０）；闽台作物特色种质创制与绿色栽培协同创新中心（福建２０１１项目Ｎｏ．２０１５⁃７５）收稿日期：２０１８⁃１２⁃２９；　　网络出版日期：２０１９⁃１２⁃２６∗通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｙｙｕａｎｓｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ

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２４０８　生　态　学　报　　　４０卷　

ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ１０ｍＬ０．５μｍｏｌ／Ｌｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ（ＭｅＪＡ）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＰＯＤ），ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ（ＰＰＯ），ａｎｄｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＬＯＸ），ａｓｗｅｌｌａｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｌｅｖｅｌｓｏｆａｌｌｅｎｅｏｘｉｄｅｃｙｃｌａｓｅ（ＡＯＣ）ａｎｄＣＯＲＯＮＡＴＩＮＥＩＮＳＥＮＳＩＴＩＶＥ１（ＣＯＩ１，ＪＡｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ）ｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆＣＭａｎｄ３５Ｓ：：ＰＳｐｌａｎｔｓｐｒｅ⁃ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ（ＡＭＦ）ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒ，ａｎｄｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｅｘｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｓｏｌｅＡ．ｓｏｌａｎｉｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｓｏｌｅｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｗｉｔｈｏｕｔａｎｙｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ＣＫ）ａｔ５ａｎｄ１０ｄａｙｓａｆｔｅｒＡ．ｓｏｌａｎｉｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．ＥｘｏｇｅｎｏｕｓｓｐｒａｙｉｎｇｏｆＭｅＪＡｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｈｅｓｐｒ２ｐｌａｎｔｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｄｉｓｅａｓｅａｆｔｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎａｎｄＭｅＪＡｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＯｕｒｆｉｎｄｉｎｇｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｉｎｄｕｃｅｄｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｙＡＭＦｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｏｍａｔｏｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．

ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＣＭａｎｄ３５Ｓ：：ＰＳｔｏｍａｔｏｐｌａｎｔｓｐｒｅ⁃ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈＦｍｔｏｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔ．Ｉｎｔｈｅｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｄｅｘｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｏｔｈｅｒｆｏｕｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏａｎｙｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｊａｉ１ｐｌａｎｔｓ

ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ；ｔｏｍａｔｏ；ｔｏｍａｔｏｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔ；ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ

生形成菌根［１］。菌根不仅能够提高植物对Ｐ、Ｎ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｍｎ和Ｃａ等矿质营养的吸收［２⁃４］，还能够增强植物对干旱、盐渍、重金属、冷、热和水淹等各种逆境胁迫的耐受能力［５⁃８］。

随着对菌根功能研究的深入，越来越多的研究表明菌根共生可以增强寄主植物对病原物的抗性，且以拮

丛枝菌根真菌（Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ，ＡＭＦ）是土壤微生物群落的重要组成分，能与维管束植物共

抗病原真菌的研究居多。周宝利等［９］研究发现ＡＭＦ能够通过提高茄子根系活力，过氧化物酶（ＰＯＤ）、多酚氧化酶（ＰＰＯ）和苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）活性来降低茄子黄萎病（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａ，Ｋｌｅｂ）的危害。Ｍｕｓｔａｆａ等［１０⁃１１］报道了接种摩西斗管囊霉（Ｆｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ）和异形根孢囊霉（Ｒｈｉｚｏｐｈａｇｕｓｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｓ）的小麦通过抑制分生孢子的数量极大地增强了对小麦白粉病（Ｂｌｕｍｅｒｉａｇｒａｍｉｎｉｓｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ）的抗性。此外，还有少量关于ＡＭＦ与植物病毒病和细菌病互作的研究。例如，Ｍａｆｆｅｉ等［１２］研究报道接种摩西斗管囊霉能够减轻番茄对黄叶卷曲撒丁岛病毒（ｙｅｌｌｏｗｌｅａｆｃｕｒｌＳａｒｄｉｎｉａｖｉｒｕｓ）的感染，菌根番茄植株表现出轻微的症状和较低浓度的病毒ＤＮＡ；Ｍｏｒａ⁃Ｒｏｍｅｒｏ等［１３］将核盘菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）和野菜黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．）接种到大豆和番茄叶片上，发现预先接种ＡＭＦ的植株表现出更强的抗病性，同时还通过嫁接实验表明砧木菌根诱导的抗性信号也能够诱导非菌根接穗的抗性反应。显然，与菌根真菌共生能够诱导植物对病原菌的抗性非常普遍。这种抗性可能是由一种或几种机制共同调节来起作用［１４］，包括改善寄主营养状况［１０⁃１１，１５⁃１６］、调节寄主次生代谢抗菌物质的合成［１７⁃１９］、诱导寄主产生防御反应［２０⁃２２］等。但目前对菌根诱导寄主抗病的信号转导途径研究比较少。

胁迫的系统响应过程［２３］。许多研究表明，ＪＡ参与植物对一些病原菌的抗性反应［２４⁃２５］。Ｖｉｊａｙａｎ等［２６］通过对拟南芥ＪＡ合成缺失三突变体ｆａｄ３ｆａｄ７ｆａｄ８的研究发现，ＪＡ是植物抵抗根腐生病菌（Ｐｙｔｈｉｕｍｍａｓｔｏｐｈｏｒｕｍ．Ｄｒｅｃｈｓ）所必须的，而外源施加ＭｅＪＡ可以恢复三突拟南芥ｆａｄ３ｆａｄ７ｆａｄ８对Ｐ．ｍａｓｔｏｐｈｏｒｕｍ的抗性；Ｋｏｏ等［２７］

茉莉酸（Ｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄ，ＪＡ）及其衍生物是一类重要的植物激素，广泛参与植物的生长发育、抵御逆境

和Ｂｒｏｗｓｅ等［２８］报道了ＪＡ缺失突变体和ＪＡ受体突变体对腐生型病原菌如畸雌腐霉菌（Ｐｙｔｈｉｕｍｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、链格孢菌轮斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃｉｓｏｌａ）、灰霉菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）等侵染失去抗性。为了应对和适应各种逆境胁迫，植物通过信号转导途径精细协调生长和防御之间的平衡，而且这种调节也存在于菌根共生过程中［２２］。越来越多的研究证明ＪＡ信号在菌根形成和菌根诱导的植物抗病性中起到积极的作用［２９⁃３０］。Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ⁃Ｇáｍｅｚ等［１６］通过全基因组分析检测菌根番茄植物叶片中基因表达的变化，并在菌根植株叶片中鉴定到７４２个系统防御诱导相关基因的表达上调，随后对其中激素相关基因的分析发现，ＡＭＦ的定殖可能诱导植物ＪＡ的积累；Ｌｉ等［１５］研究也证明菌根真菌侵染后的大豆植株ＪＡ含量更高；Ｐｏｚｏ等［２２］发现菌根真菌侵染

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　７期　　　林熠斌　等：茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制　２４０９

后番茄叶片对灰霉菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）感染率显著低于对照植株，荧光定量ＰＣＲ结果显示，菌根番茄叶片受ＪＡ调节的防御基因的相对表达量显著高于对照。可见，菌根共生能够诱导植物内源激素稳态的变化，进而增强植株对逆境胁迫的耐受能力［３１⁃３２］。以往研究已经发现ＪＡ信号可能参与菌根真菌对寄主植物抗病性的诱导，本研究利用番茄ＪＡ信号途径过表达及突变体材料来进一步证明ＪＡ信号在菌根真菌诱导植物的抗病性中的重要作用，是对前人研究的补充。

番茄早疫病（ｔｏｍａｔｏｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔ）又称为“轮纹病”，是由半知菌亚门链格孢属茄链格孢菌［Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ（ＥｌｌｉｓｅｔＧ．Ｍａｒｔｉｎ）Ｓｏｒａｕｅｒ］引起的一种死体营养型真菌病害，在我国是危害番茄的主要病害之一。主要在番茄叶、茎和果实上发病。叶片受茄链格孢菌侵染后，开始时出现暗褐色小斑点，渐渐扩大成圆形至椭圆形病斑，并有明显的同心轮纹，边缘具黄色或黄绿色晕圈，潮湿时产生黑色霉层状态的病斑。番茄早疫病病原菌危害范围广泛，主要危害番茄，还会危害茄子、辣椒和马铃薯等多种茄科蔬菜作物。过去研究表明，植物对死体营养型真菌病害的抗性与ＪＡ信号途径有关。本论文用摩西斗管囊霉（Ｆｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ）接种番茄茉莉酸信号途径四个不同基因型材料，待菌根真菌在根系定殖后，进行早疫病菌接种和茉莉酸甲酯处理，研究ＪＡ在菌根真菌诱导的植物抗病中的作用，揭示菌根影响植物抗病的机制。１　材料与方法１．１　实验材料

番茄茉莉酸信号转导途径前系统素过表达材料３５Ｓ：：ＰＳ（３５Ｓ：：ｐｒｏｓｙｓｔｅｍｉｎ）、茉莉酸合成突变体ｓｐｒ２、茉莉酸信号识别突变体ｊａｉ１及其对应的野生型番茄ＣＭ（ＳｏｌａｎｕｍｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍＭｉｌｌ．ｃｖＣａｓｔｌｅｍａｒｔ）由中国科学院遗传与发育生物学研究所李传友研究员提供。摩西斗管囊霉（Ｆｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ，Ｆｍ）由山东省青岛农业大学菌根生物技术研究所提供，经本实验室用广东省农科院提供的丹６５２玉米扩繁后，以含土壤、孢子、菌丝和根段的混合物作为接种物。病原菌茄链格孢菌［Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ（ＥｌｌｉｓｅｔＧ．Ｍａｒｔｉｎ）Ｓｏｒａｕｅｒ，Ａｓ］由华南农业大学真菌研究室周而勋教授提供。培养基质土壤取自校内农场，过１０ｍｍ筛，高压蒸汽湿热灭菌２次（３０１．２　实验设计

ｍｉｎ／次，１０３ｋＰａ，１２１℃），以消除土壤中真菌孢子等其他类群微生物。

盆栽实验在玻璃温室中进行，实验共设５个处理。对照组ＣＫ：正常健康生长的番茄植株，不进行任何处理；Ｆｍ处理：番茄幼苗根系只接种Ｆｍ１００ｇ（约３５０个孢子／１００ｇ），番茄叶片未接种Ａｓ也未喷施ＭｅＪＡ处理的健康番茄植株；Ａｓ处理：番茄幼苗根系未接种Ｆｍ，番茄叶片未喷施ＭｅＪＡ处理，仅在第４５天时接种Ａｓ的番茄植株；Ｆｍ＋Ａｓ处理：番茄幼苗根系预先接种Ｆｍ１００ｇ，第４５天时对番茄叶片进行Ａｓ接种处理，但未喷施ＭｅＪＡ处理的番茄植株；Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理：番茄幼苗根系预先接种Ｆｍ１００ｇ，在第３０天时对番茄叶片喷施１．３　实验方法

ＭｅＪＡ，第４５天时接种Ａｓ。

番茄种子用８％Ｈ２Ｏ２消毒１０ｍｉｎ，灭菌水冲洗５次后催芽生长至两叶期，随后挑选生长一致的幼苗移栽

到经０．１％ＫＭｎＯ４溶液消毒的直径为１６ｃｍ塑料花盆中。塑料盆内装有灭菌的砂壤土２．５ｋｇ，Ｆｍ菌剂１００ｇ

（对照未接种Ｆｍ菌剂），最后覆盖０．５ｋｇ灭菌的土壤。每个实验处理设置６个重复，随机摆放在玻璃温室中，光周期１４ｈ／１０ｈ（Ｌ／Ｄ），维持相对湿度在７５％，温度２２—２５℃，每７ｄ浇一次Ｈｏａｇｌａｎｄ完全营养液。番茄幼苗刚移栽时接种Ｆｍ，在番茄生长３０ｄ时每株番茄喷施１０ｍＬＭｅＪＡ（０．５μｍｏｌ／Ｌ），以等量加入Ｔｒｉｔｏｎ⁃Ｘ⁃１００的蒸馏水作为对照（图１），在番茄生长４５ｄ时用喷雾法接种Ａｓ分生孢子悬浮液２０ｍＬ（４×１０７ｃｆｕ／ｍＬ），对照以等量的无菌水代替孢子悬浮液（图１）。番茄植株生长４５ｄ后经乳酸酚台盼蓝染色液染色检测根系菌根真菌侵染率。其中，ＭｅＪＡ配制方法：ＭｅＪＡ溶于等量Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ⁃１００溶液中后用蒸馏水配置成０．５μｍｏｌ／ＬＭｅＪＡ溶液，对照则直接用等量Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ⁃１００加入等量蒸馏水。

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２４１０　生　态　学　报　　　４０卷　

１．４　测定指标与方法１．４．１　菌根侵染率的测定

番茄苗生长３０ｄ和４５ｄ后分别用打孔器（直径１ｃｍ）取５个处理番茄根系各１００段，放于盛有存贮液（按体积比配置是９９％乙醇：６０％乙酸：ｄｄＨ２Ｏ＝６００∶１２０∶８０）的２．５ｍＬ塑料ＥＰ管内，于４℃冰箱中保

存备用。菌根侵染率的测定参考Ｋｏｓｋｅ等［３３］的方法稍加修改：待测根系首先用ｄｄＨ２Ｏ清洗３次，去除残留存贮液，随后加２ｍＬ２％ＫＯＨ，并于９６℃加热５ｍｉｎ；其２％ＨＣｌ，并于９６℃加热５ｍｉｎ；最后去除残留的ＨＣｌ，加入２ｍＬ０．０５％乳酸酚台盼蓝染色液，９６℃加热２０ｍｉｎ染色，随后倒掉染色液，加２ｍＬ脱色液，脱色２４ｈ后于次，用ｄｄＨ２Ｏ清洗３次，去除残留的ＫＯＨ，再加２ｍＬ

图１　实验装置示意图Ｆｉｇ．１　Ｓｋｅｔｃｈｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｅｔｕｐ

番茄幼苗移栽时接种丛枝菌根真菌摩西斗管囊霉（Ｆｍ），３０ｄ时对叶片喷施茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）处理，４５ｄ时对叶片进行茄链格孢菌（Ａｓ）处理

ＯｌｙｍｐｕｓＢＸ５１显微镜下观察Ｆｍ侵染情况。菌根侵染率的测定采用根段侵染率加权法进行计算［３４］。另采用ＷＧＡ⁃４８８（携带Ａｌｅｘａ４８８荧光标记的麦胚凝集素）染色液对根系进行染色，具体方法和步骤参照Ｊｉａｎｇ等［３５］的方法，随后用激光共聚焦显微镜ＬＳＭ５１０（ＺＥＩＳＳ）观察Ｆｍ侵染情况。１．４．２　发病率和病情指数的测定

在确定丛枝菌根真菌Ｆｍ侵染番茄植株根系后，在番茄移栽４５ｄ时，对Ａｓ、Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的番茄叶片接种茄链格孢菌。接种病原菌１０ｄ后记录发病率和发病程度。根据植株发病的程度计算病情指数［３６］。发病程度分为５级，０级：叶片上无病斑；１级：病斑面积占羽状叶的１／４以下；２级：病斑面积占羽状叶一半以上或全部小叶枯死。

发病率（ＤＰ）和病情指数（ＤＩ）计算公式为：

ＤＰ＝（发病叶数／叶片总数）×１００％

的１／４—１／２；３级：病斑面积占羽状叶的１／２—３／４，近一半小叶枯死；４级：病斑面积占羽状叶的３／４以上，

１．４．３　抗氧化物酶活性测定

ＤＩ＝∑（病级叶数×发病等级）／（发病最重级数×叶片总数）×１００％

ＰＶＰＰ），置冰浴上研磨匀浆，随后转入离心管，４℃１２０００×ｇ离心１５ｍｉｎ，取上清液，放入４℃冰箱中保存备用。其中，过氧化物酶（ＰＯＤ）活性采用愈创木酚法测定参照袁庆华等［３７］的方法；多酚氧化酶（ＰＰＯ）活性测定参照朱广廉和钟海文［３８］的方法；脂氧合酶（ＬＯＸ）活性测定参照姚锋先等［３９］的方法。１．４．４　总ＲＮＡ提取和ｃＤＮＡ合成

试剂盒（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）提供的方法提取番茄叶片总ＲＮＡ，经ＤＮａｓｅＩ处理后，吸取２mｇＲＮＡ用于ｃＤＮＡ合成。ｃＤＮＡ合成体系为２０mＬ，所用试剂盒为Ｇｏｓｃｒｉｐｔ系列Ｐｒｏｍｅｇａ逆转录试剂盒，逆转录得到的ｃＤＮＡ放于１．４．５　荧光定量ＰＣＲ分析

依据已报道参与抗虫的相关防御基因：ＡＯＣ（丙二烯氧化物环化酶基因）、ＣＯＩ１（茉莉酸信号受体基因）；Ｕｂｉ３（番茄组成型表达基因，内参基因）的序列设计特异引物进行荧光定量ＰＣＲ，扩增引物见表１。按照康为世纪的ＵｌｔｒａＳＹＢＲ荧光定量ＰＣＲ试剂盒的程序进行荧光定量ＰＣＲ反应。反应条件为：９５℃预变性３ｍｉｎ，４０个循环包括９５℃变性１５ｓ，退火温度（ＡＯＣ：５６．５℃；ＣＯＩ１：５１．５℃；ＵＢＩ３：５１．５℃）３０ｓ，７２℃延伸１５ｓ。引物合成由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。

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－８０℃冰箱冻存备用。

对以上５种处理的番茄植株分别在接种病原菌０、５、１０ｄ后进行叶片取样，液氮研磨，用ＴｒｉｚｏｌＴＭＲｅａｇｅｎｔ

称取１．２处理的番茄叶片０．２ｇ，加入２．５ｍＬ０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．８，内含５％聚乙烯吡咯烷酮

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表１　荧光定量ＰＣＲ所用的特异性引物

Ｔａｂｌｅ１　Ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｆｏｒｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＰＣＲ

基因ＧｅｎｅＡＯＣＣＯＩ１Ｕｂｉ３

基因登陆号ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＷ６２４０５８ＡＹ４２３５５０Ｘ５８２５３

特异引物序列Ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒ

　２４１１

Ｆ：５′⁃ＣＴＣＧＧＡＧＡＴＣＴＴＧＴＣＣＣＣＴＴＴ⁃３′Ｒ：５′⁃ＣＴＣＣＴＴＴＣＴＴＣＴＣＴＴＣＴＴＣＧＴＧＣＴ⁃３′Ｆ：５′⁃ＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＴＧＴＴＴＣＴＴ⁃３′Ｒ：５′⁃ＡＣＣＧＣＡＣＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＣ⁃３′Ｆ：５′⁃ＴＣＣＡＴＣＴＣＧＴＧＣＴＣＣＧＴＣＴ⁃３′

Ｒ：５′⁃ＧＡＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＴＣＡＡＣＣ⁃３′

引物长度Ｐｒｉｍｅｒｓｉｚｅ１１５ｂｐ１４９ｂｐ１４４ｂｐ

１．５　数据处理

利用Ｅｘｃｅｌ２０１３软件录入数据和ＳＰＳＳ１９软件对数据进行统计分析，用Ｏｒｉｇｉｎ２０１８软件录入数据和作图，同一时间点不同处理之间的差异显著性用Ｔｕｋｅｙ′ｓ多重比较（Ｐ＜０．０５）。２　结果与分析

２．１　摩西斗管囊霉侵染番茄根系情况

乳酸酚台盼蓝染色结果表明，接种Ｆｍ的番茄根系（ＣＭ、３５Ｓ：：ＰＳ、ｓｐｒ２和ｊａｉ１）在第３０天和４５天时均被侵染，且ＣＭ、３５Ｓ：：ＰＳ和ｊａｉ１的菌根侵染率较高，而ｓｐｒ２的菌根侵染率最低（表２）。其中第４５天时，外源施加ＭｅＪＡ处理的ＣＭ植株比正常生长的ＣＭ植株的菌根侵染率高出３６％；外源施加ＭｅＪＡ处理的ｓｐｒ２植株比正常生长的ｓｐｒ２植株的菌根侵染率高出１４６％；而外源施加ＭｅＪＡ与否对３５Ｓ：：ＰＳ和ｊａｉ１的菌根侵染率无显著影响（表２）。从图２可以看出，乳酸酚台盼蓝染色和ＷＧＡ⁃４８８荧光染色Ｆｍ侵染的番茄根系后，显微镜下能看到明显的丛枝结构，说明Ｆｍ和寄主番茄植株形成了良好的共生关系。

表２　接种摩西斗管囊霉（Ｆｍ）３０ｄ和４５ｄ后番茄根系菌根侵染情况

Ｔａｂｌｅ２　Ｓｔａｔｕｓｏｆｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｔｏｍａｔｏ３０ａｎｄ４５ｄａｙｓａｆｔｅｒｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＦｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅ基因型Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ３５Ｓ：：ＰＳｓｐｒ２ｊａｉ１ＣＭ

－Ｆｍ０ｄ０ｄ０ｃ０ｃ

３０ｄ＋Ｆｍ

＋Ｆｍ

４５ｄ

＋Ｆｍ＋ＭｅＪＡ４３．２±２．０ａ４６．４±４．７ａ２３．４±２．０ａ５７．３±４．３ａ

２５．０±３．２ｃ

３６．１±１．４ｂ１４．３±１．６ｂ３９．０±４．９ｂ

３１．８±０．７ｂ４３．３±１．６ａ９．５±２．０ｃ５１．７±５．５ａ

　　不同小写字母表示同一基因型番茄不同处理间差异显著性（Ｐ＜０．０５）

２．２　不同处理对叶片防御酶活性的影响

由图３可知，未接种Ａｓ时（０ｄ），ＰＯＤ、ＰＰＯ和ＬＯＸ活性在不同基因型番茄植株的５个处理中均无显著差异。其中，接种Ａｓ５ｄ和１０ｄ后，同ＣＫ相比，Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的ＣＭ及３５Ｓ：：ＰＳ叶片中的ＰＯＤ酶活性被诱导升高。其中接种Ａｓ５ｄ后，ｓｐｒ２和ｊａｉ１材料在各处理间的ＰＯＤ酶活性均无显著差异；接种Ａｓ１０ｄ后，３５Ｓ：：ＰＳ番茄材料中ＰＯＤ酶活性被诱导升高（图３）。同理，在第１０天时，ｓｐｒ２植株的Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的ＰＯＤ酶活性高于其他４个处理，说明外源施加ＭｅＪＡ可增强ｓｐｒ２材料的抗病性，但其酶活性低于在接种Ａｓ５ｄ、１０ｄ后Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的ＣＭ及３５Ｓ：：ＰＳ叶片中的ＰＰＯ酶活性被诱导升高，分别比ＣＫ高出６８％，７５％和６７％，７５％，比Ｆｍ处理高出５５％，６１％和５５％，６２％，比Ａｓ处理高出５２％，５９％和５２％，５９％，而ｓｐｒ２和ｊａｉ１材料的不同处理间ＰＰＯ酶活性在接种Ａｓ５ｄ后无显著差异，接种Ａｓ１０ｄ后仅ｓｐｒ２

ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ

植株的Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下ＰＰＯ酶活性高于其他４个处理（图３）。接种Ａｓ５ｄ后，Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的

ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ材料中相对应的处理（图３）。而ｊａｉ１材料的５个处理间的ＰＯＤ酶活性并无显著差异（图３）。

２４１２　生　态　学　报　　　４０卷　

３５Ｓ：：ＰＳ番茄叶片中ＬＯＸ活性明显高于其他处理，而ＣＭ、ｓｐｒ２和ｊａｉ１材料的不同处理间ＬＯＸ酶活性无显著Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的ＬＯＸ酶活性都开始显２４０％，２６６％；且３５Ｓ：：ＰＳ番茄植株的Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的ＬＯＸ酶活性分别比ＡＳ处理高６６％和中的ＬＯＸ酶活性高于其他４个处理，而ｊａｉ１材料无论是否预先接种Ｆｍ、施加ＭｅＪＡ以及接种Ａｓ，其ＬＯＸ酶３５Ｓ：：ＰＳ植株的Ａｓ、Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理都可活性在５个处理间并无显著差异（图３）。可见，ＣＭ和

图２　台盼蓝和ＷＧＡ染色下的丛枝结构

Ｆｉｇ．２　ＡｒｂｕｓｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｕｎｄｅｒｔｒｙｐａｎｂｌｕｅａｎｄＷＧＡｓｔａｉｎｉｎｇ　

差异；接种Ａｓ１０ｄ后，ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄植株的Ａｓ、著上升，分别比ＣＫ高出１０５％，３０３％，３３５％和１０３％，

７９％，差异显著（图３）。ｓｐｒ２植株的Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理

诱导ＰＯＤ和ＬＯＸ酶活性升高；而ＰＰＯ酶活性仅在Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下有所升高（图３）。ｓｐｒ２植株仅在Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理的第１０ｄ有所升高，但其酶活性低于ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ材料中相对应的处理（图３），说明Ｆｍ诱导番茄提高抗病性与ＪＡ是密切相关的。

图３　接种摩西斗管囊霉和茄链格孢菌及茉莉酸甲酯处理对不同基因型番茄叶片过氧化物酶（ＰＯＤ）、多酚氧化酶（ＰＰＯ）和脂氧合酶（ＬＯＸ）活性影响

Ｆｉｇ．３　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆＦｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅａｎｄＡｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ，ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ（ＭｅＪＡ）ｏｎｅｎｚｙｍｅｓａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＰＯＤ），ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ（ＰＰＯ），ａｎｄｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＬＯＸ）ｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｆｏｕｒｔｏｍａｔｏｇｅｎｏｔｙｐｅｓ

ＣＫ：对照；Ｆｍ：番茄幼苗根系仅接种摩西斗管囊霉；Ａｓ：番茄叶片仅接种茄链格孢菌；Ｆｍ＋Ａｓ：番茄幼苗根系预先接种摩西斗管囊霉后在对叶片接种茄链格孢菌；Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ：番茄幼苗根系预先接种摩西斗管囊霉后，对叶片外源喷施茉莉酸甲酯，最后接种茄链格孢菌；不同小写字母表示同一基因型番茄不同处理间差异显著性（Ｐ＜０．０５）

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　７期　　　林熠斌　等：茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制　２４１３

２．３　不同处理对番茄茉莉酸合成途径基因及茉莉酸受体防御启动基因表达的影响

由图４可以看出，第０天时，ＣＭ、３５Ｓ：：ＰＳ、ｓｐｒ２和ｊａｉ１材料的不同处理的番茄叶片中ＡＯＣ和ＣＯＩ１基因表达量无显著差异；第５天时，预先接种Ｆｍ并且施加ＭｅＪＡ处理的ＣＭ、３５Ｓ：：ＰＳ及ｓｐｒ２番茄植株在受到Ａｓ侵染时，ＡＯＣ基因表达量迅速升高，分别比ＣＫ高出１２．２、１３．１、７．４倍，比Ｆｍ处理高出１１．１、１２．３、７倍，比Ａｓ处理高出５．７、５．１、６．２倍；接种Ａｓ１０ｄ后，ＣＭ及３５Ｓ：：ＰＳ番茄植株在Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下，其ＡＯＣ基因被诱导表达，说明预先接种Ｆｍ番茄的ＡＯＣ基因对于Ａｓ侵染有更强的响应，且外源喷施ＭｅＪＡ会使这种响应更为迅速。随着Ａｓ侵染时间的延长，ＣＭ及３５Ｓ：：ＰＳ番茄叶片中ＡＯＣ基因也被诱导表达。同理，接６．１倍，ＣＭ和ｓｐｒ２叶片中的Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下ＣＯＩ１基因表达量分别比ＣＫ高出３．１倍和１．９倍（图４）。接种Ａｓ１０ｄ后，ＣＭ及３５Ｓ：：ＰＳ番茄叶片在Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下，其ＣＯＩ１基因的诱导表达量分别比ＣＫ高９．５、１０．３倍和９．９、６．７倍。外源喷施ＭｅＪＡ处理的ｓｐｒ２叶片中ＡＯＣ和ＣＯＩ１基因可被诱导表达，而ｊａｉ１材料５个处理中的ＡＯＣ和ＣＯＩ１基因均无显著变化（图４）。

种Ａｓ５ｄ后，３５Ｓ：：ＰＳ叶片中Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下ＣＯＩ１基因被诱导表达，分别比ＣＫ高出２．６倍和

图４　接种摩西斗管囊霉和茄链格孢菌及茉莉酸甲酯处理对不同基因型番茄叶片丙二烯氧化物环化酶基因（ＡＯＣ）和茉莉酸信号受体基因（ＣＯＩ１）的影响

Ｆｉｇ．４　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆＦｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅａｎｄＡｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ，ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ（ＭｅＪＡ）ｏｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｌｅｖｅｌｓｏｆｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇａｌｌｅｎｅｏｘｉｄｅｃｙｃｌａｓｅ（ＡＯＣ）ａｎｄＣＯＲＯＮＡＴＩＮＥＩＮＳＥＮＳＩＴＩＶＥ１（ＣＯＩ１）ｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｆｏｕｒｔｏｍａｔｏｇｅｎｏｔｙｐｅｓＣＫ：对照；Ｆｍ：番茄幼苗根系仅接种摩西斗管囊霉；Ａｓ：番茄叶片仅接种茄链格孢菌；Ｆｍ＋Ａｓ：番茄幼苗根系预先接种摩西斗管囊霉后在对叶片接种茄链格孢菌；Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ：番茄幼苗根系预先接种摩西斗管囊霉后，对叶片外源喷施茉莉酸甲酯，最后接种茄链格孢菌。不同小写字母表示同一基因型番茄不同处理间差异显著性（Ｐ＜０．０５）

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２４１４　生　态　学　报　　　４０卷　

２．４　不同处理的番茄植株在接种早疫病菌１０ｄ后的发病率和病情指数

由表３数据得出，由于ＣＫ及Ｆｍ处理的各基因型番茄并未接种早疫病病原菌茄链格孢菌（Ａｓ），故发病率和病情指数均为０。而Ａｓ、Ｆｍ＋Ａｓ以及Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下的４个基因型番茄均有发病，其中与单独接种Ａｓ相比，预先接种Ｆｍ可减缓ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄植株的发病率和病情指数，且继续在外源喷施ＭｅＪＡ后，发现可显著降低番茄的发病情况（表３）。此外，３５Ｓ：：ＰＳ的抗病能力最强，在Ｆｍ＋Ａｓ和Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理下其发病率最低。预先接种Ｆｍ的ｓｐｒ２植株中，虽然发病趋势有所减缓，但与仅被Ａｓ侵染的ｓｐｒ２相比，发病率差异不显著；而预先接种Ｆｍ在进行回补ＭｅＪＡ的ｓｐｒ２植株中，发病率和病情指数均有显著下降（表３）。而在ｊａｉ１植株中，是否预先接种Ｆｍ，以及是否进行ＭｅＪＡ回补，对其发病率和病情指数均无影响，早疫病发病率均达到５０％以上。同理，在接种Ａｓ１０ｄ后，ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ植株中Ａｓ、Ｆｍ＋Ａｓ以及Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ处理间的发病率和病情指数依次降低且处理间差异均显著（表３）。

表３　接种摩西斗管囊霉和外源添加茉莉酸甲酯对４种基因型番茄早疫病发病的影响

Ｔａｂｌｅ３　ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｂｙＦｕｎｎｅｌｉｆｏｒｍｉｓｍｏｓｓｅａｅａｎｄｅｘｏｇｅｎｏｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ（ＭｅＪＡ）ｏｎｅａｒｌｙｂｌｉｇｈｔｄｉｓｅａｓｅｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙＡｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉａｉｎｆｏｕｒｔｏｍａｔｏｇｅｎｏｔｙｐｅｓ处理ＴｒｅａｔｍｅｎｔＣＫＦｍＡｓ

病情指数Ｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｅｘ

ＣＭ０ｄ０ｄ

３５Ｓ：：ＰＳ０ｄ０ｄ

ｓｐｒ２０ｃ０ｃ

ｊａｉ１０ｂ０ｂ

ＣＭ０ｃ０ｃ

发病率Ｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅ／％３５Ｓ：：ＰＳ０ｄ０ｄ

ｓｐｒ２０ｃ０ｃ

ｊａｉ１０ｂ０ｂ

Ｆｍ＋Ａｓ

３４．６±３．７ａ１２．３±３．８ｃ

Ｆｍ＋ＭｅＪＡ＋Ａｓ

２２．０±５．４ｂ

２８．３±２．５ａ１１．３±４．３ｃ

１７．０±５．５ｂ

４８．０±３．１ａ４３．３±３．８ａ３１．６±２．７ｂ

５６．０±９．４ａ５８．３±４．２ａ４９．６±１０．９ａ

４２．３±３．４ａ

３３．３±５．４ｂ３１．０±３．８ｂ

３１．４±２．５ａ１５．８±４．３ｃ

１４．５±５．５ｂ

５２．０±３．１ａ

４８．１±３．８ａｂ３５．６±２．７ｂ

５４．０±９．４ａ５３．２±４．２ａ５０．１±１０．９ａ

　　同列不同小写字母表示同一基因型番茄不同处理间差异显著（Ｐ＜０．０５）

３　结论和讨论

丛枝菌根真菌侵染寄主植物后会促进植物根系生长、引起植物分子和生化反应［４０⁃４２］。ＡＭＦ侵染植物根

系形成菌根过程中，可通过水杨酸（ｓａｌｉｃｙｌａｔｅａｃｉｄ，ＳＡ）与茉莉酸信号通路来调节植物防御系统，进而提高植物应对生物胁迫和非生物胁迫的能力［２０，３１］。尤其茉莉酸信号转导途径在丛枝菌根真菌侵染寄主、形成菌根特别是ＡＯＣ及Ｆａｄ２在菌根结构的形成中必不可少。此外，茉莉酸在真菌性病原菌、虫害诱导以及机械损伤的直接和间接防御反应中也起重要作用［４４⁃４５］。基于此，本实验通过使用过表达前系统素转基因番茄（３５Ｓ：：Ｐｒｏｓｙｓｔｅｍｉｎ）、ＪＡ合成突变体番茄（ｓｐｒ２）、茉莉酸识别突变体（ｊａｉ１）及其对应的野生型番茄（ＣＭ）研究了茉莉酸信号转导途径在菌根诱导番茄的抗病过程中的作用机制。

众所周知，不同的信号转导途径由不同类型的病原菌诱发，即不同的病原体侵染植物，植物启动的信号转导途径就可能不同，活体营养型的病原微生物诱发ＳＡ依赖的信号途径，坏死营养型的病原微生物或机械伤害却触发ＪＡ⁃ＥＴ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ，ＥＴ）依赖的信号转导途径。在菌根诱导的番茄抗病防御反应中，来源于类十八烷的信号转导途径，即茉莉酸的信号转导途径，被认为在植物的防御机制中起核心作用［４６⁃４７］。该信号转导途径是亚麻酸通过脂氧合酶（ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ＬＯＸ）、丙二烯氧化物合酶（ａｌｌｅｌｅｏｘｉｄｅｓｙｓｎｔｈａｓｅ，ＡＯＳ）等一系列酶促反应，最终生成植物体内重要的信号转导物质茉莉酸及其衍生物ＭｅＪＡ的生物合成途径。同样，与植物代谢有密切关系的ＬＯＸ、防御酶ＰＰＯ以及作为植物体内主要抗氧化酶和活性氧清除剂的ＰＯＤ也参与植物的防御反应，酶活性的提高是诱导防御物质产生和增加防御能力的前提［４８⁃４９］。

本研究中，不同基因型番茄所表现出的抗病性差异，更加清晰的证明ＡＭＦ与ＪＡ信号途径之间的关系。过程中起到非常重要的作用。Ｈａｕｓｅ等［２９］和Ｍｉｒｉａｍ等［４３］的研究表明，茉莉酸一系列前体合成基因的表达，

研究结果表明，预先接种Ｆｍ的ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄，在叶片接种Ａｓ（处理Ｆｍ＋Ａｓ）的５和１０ｄ后，其叶片中ＰＯＤ、ＰＰＯ和ＬＯＸ活性以及ＡＯＣ和ＣＯＩ１的转录水平显著高于Ａｓ、Ｆｍ和ＣＫ处理组，且发病率和病情指数也

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　７期　　　林熠斌　等：茉莉酸介导丛枝菌根真菌诱导番茄抗早疫病的机制　２４１５

显著降低。同时，外源喷施ＭｅＪＡ可增强预先接种Ｆｍ的ＣＭ和３５Ｓ：：ＰＳ番茄植抵抗早疫病的能力。而ｊａｉ１番茄对Ａｓ和ＭｅＪＡ处理并无防御响应，可见Ｆｍ侵染诱导提高番茄抗早疫病是与ＪＡ途径密切相关的。此外，ｓｐｒ２突变体番茄植株中的Ｆｍ侵染率、酶活性和基因表达降低，可能的原因是ＡＭ孢子在侵染的过程中依赖于茉莉酸途径来促进地上部代谢物偏向地下部运转，菌根从中吸取营养进行生长代谢；也可能由于茉莉酸合成途径的一些中间产物，如亚麻酸，为菌根结构建立重要的碳源，缺乏时则会造成ＡＭＦ在寄主根内发育不良。在ｊａｉ１突变体中，植株失去了调节外源真菌侵染的能力，使得ＡＭＦ的侵染率及早疫病菌的侵染上升。对于以ＪＡ作为内源激素进行生理及抗性调节的植株来说，ＪＡ途径的激活调节了其与周边环境中微生物之间的关系。可见，ＪＡ途径的激活是ＡＭＦ与番茄植株建立共生关系的必要过程，但是ＪＡ途径主要的是寄主植物与ＡＭＦ的共生关系，还是作为长距离运输的信号分子在寄主植物受到病害时快速诱导系统防御的增强，抑或兼而有之，需要进一步研究。总之，良好共生关系的构建是ＡＭＦ诱导植物提高抗病性的基础和前提。

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ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｕｐｔａｋｅｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｒｏｏｔｓｈａｖｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇａｎｄｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇｐｌａｎｔｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１５６（３）：１０５０⁃１０５７．

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇａｌｓｐｅｃｉｅｓ，ａｎｄｐｌａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｉｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｗｈｅａｔｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２０１６，２６（７）：６８５⁃６９７．１０２６⁃１０３０．

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉｓ．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，２００８，３０４（１／２）：１１７⁃１３１．ＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１５，８１：１４７⁃１５８．

［１１］　ＭｕｓｔａｆａＧ，ＫｈｏｎｇＮＧ，ＴｉｓｓｅｒａｎｔＢ，ＦｏｎｔａｉｎｅＪ，Ｍａｇｎｉｎ⁃ＲｏｂｅｒｔＭ，ＲｅｉｇｎａｕｌｔＰ，ＳａｈｒａｏｕｉＡＬＨ．Ｄｅｆｅｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈ［１２］　ＭａｆｆｅｉＧ，ＭｉｏｚｚｉＬ，ＦｉｏｒｉｌｌｉＶ，ＮｏｖｅｒｏＭ，ＬａｎｆｒａｎｃｏＬ，ＡｃｃｏｔｔｏＧＰ．Ｔｈｅａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉｓａｔｔｅｎｕａｔｅｓｓｙｍｐｔｏｍｓｅｖｅｒｉｔｙａｎｄ［１３］　Ｍｏｒａ⁃ＲｏｍｅｒｏＧＡ，Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ⁃ＧáｍｅｚＲＧ，Ｇａｌｉｎｄｏ⁃ＦｌｏｒｅｓＨ，Ｇｏｎｚáｌｅｚ⁃ＯｒｔíｚＭＡ，Ｆéｌｉｘ⁃ＧａｓｔéｌｕｍＲ，Ｍａｌｄｏｎａｄｏ⁃ＭｅｎｄｏｚａＩＥ，ＳａｌｉｎａｓＰéｒｅｚＲ，

ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ．Ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ，２０１５，６６（２）：５５⁃６４．

ｒｅｄｕｃｅｓｖｉｒｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｏｍａｔｏｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙＴｏｍａｔｏｙｅｌｌｏｗｌｅａｆｃｕｒｌＳａｒｄｉｎｉａｖｉｒｕｓ（ＴＹＬＣＳＶ）．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２０１４，２４（３）：１７９⁃１８６．ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｗｈｅａｔａｇａｉｎｓｔｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１７，４４（４）：４４３⁃４５５．

Ｌｅóｎ⁃ＦéｌｉｘＪ，Ｍａｒｔíｎｅｚ⁃ＶａｌｅｎｚｕｅｌａＭＣ，Ｌóｐｅｚ⁃ＭｅｙｅｒＭ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｓｂｏｔｈｇｅｎｏｔｙｐｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｇｒａｆｔ⁃

［１４］　ＶｉｅｒｈｅｉｌｉｇＨ，ＳｔｅｉｎｋｅｌｌｎｅｒＳ，ＫｈａｏｓａａｄＴ，Ｇａｒｃｉａ⁃ＧａｒｒｉｄｏＪＭ．Ｔｈｅｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｆｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎｏｎｓｏｉｌｂｏｒｎｅｆｕｎｇａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓａｎｄｔｈｅ［１５］　ＬｉＹＪ，ＬｉｕＺＬ，ＨｏｕＨＹ，ＬｅｉＨ，ＺｈｕＸＣ，ＬｉＸＨ，ＨｅＸＹ，ＴｉａｎＣＪ．Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ⁃ｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ

ｓｏｊａｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｎｓｏｙｂｅａｎｌｅａｖｅｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙａｎｅｔｗｏｒｋｉｎｖｏｌｖｉｎｇｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅ，ｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｃａｒｂｏｎａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎ．ＡｃｔａＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉａｅＰｌａｎｔａｒｕｍ，２０１３，３５（１２）：３４６５⁃３４７５．

ａｕｔｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡＭｓｙｍｂｉｏｓｉｓ：ｏｎｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｔｗｏｅｆｆｅｃｔｓ？／／Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ．Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００８：３０７⁃３２０．

［１６］　Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ⁃ＧáｍｅｚＲＧ，Ｂｕｅｎｏ⁃ＩｂａｒｒａＭＡ，Ｃｒｕｚ⁃ＭｅｎｄíｖｉｌＡ，Ｃａｌｄｅｒóｎ⁃ＶáｚｑｕｅｚＣＬ，Ｒａｍíｒｅｚ⁃ＤｏｕｒｉｅｔＣＭ，Ｍａｌｄｏｎａｄｏ⁃ＭｅｎｄｏｚａＩＥ，Ｖｉｌｌａｌｏｂｏｓ⁃

ＬóｐｅｚＭÁ，Ｖａｌｄｅｚ⁃ＯｒｔíｚÁ，Ｌóｐｅｚ⁃ＭｅｙｅｒＭ．Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉｓ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｈａｎｇｅｓｉｎｓｏｌａｎｕｍｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍｌｅａｖｅｓｒｅｖｅａｌｅｄｂｙＲＮＡ⁃ｓｅｑａｎａｌｙｓｉｓ．ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｅｒ，２０１６，３４（１）：８９⁃１０２．

［１７］　ＳｏｎｇＹＹ，ＣａｏＭ，ＸｉｅＬＪ，ＬｉａｎｇＸＴ，ＺｅｎｇＲＳ，ＳｕＹＪ，ＨｕａｎｇＪＨ，ＷａｎｇＲＬ，ＬｕｏＳＭ．ＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆＤＩＭＢＯＡａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｓｙｓｔｅｍｉｃ［１８］　ＺｕｂｅｋＳ，ＳｔｏｊａｋｏｗｓｋａＡ，ＡｎｉｅｌｓｋａＴ，ＴｕｒｎａｕＫ．ＡｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉａｌｔｅｒｔｈｙｍｏｌｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＩｎｕｌａｅｎｓｉｆｏｌｉａＬ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，

ｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｓａｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｃｏｒｎ（ＺｅａｍａｙｓＬ．）ｔｏｓｈｅａｔｈｂｌｉｇｈｔ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２０１１，２１（８）：７２１⁃７３１．

ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ

２４１６　生　态　学　报　　　４０卷　

［１９］　ＤｅｌａＲｏｓａ⁃ＭｅｒａＣＪ，Ｆｅｒｒｅｒａ⁃ＣｅｒｒａｔｏＲ，ＡｌａｒｃóｎＡ，ｄｅＪｅｓúｓＳáｎｃｈｅｚ⁃ＣｏｌíｎＭ，Ｍｕñｏｚ⁃ＭｕñｉｚＯＤ．Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍ［２０］　ＪｕｎｇＳＣ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ⁃ＭｅｄｉｎａＡ，Ｌｏｐｅｚ⁃ＲａｅｚＪＡ，ＰｏｚｏＭＪ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｐｒｉｍｉｎｇｏｆｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ［２１］　ＦｅｒｎáｎｄｅｚＩ，ＭｅｒｌｏｓＭ，Ｌóｐｅｚ⁃ＲáｅｚＪＡ，Ｍａｒｔíｎｅｚ⁃ＭｅｄｉｎａＡ，ＦｅｒｒｏｌＮ，ＡｚｃóｎＣ，ＢｏｎｆａｎｔｅＰ，ＦｌｏｒｓＶ，ＰｏｚｏＭＪ．Ｄｅｆｅｎｓｅｒｅｌａｔｅｄｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓ［２２］　ＰｏｚｏＭＪ，Ｌóｐｅｚ⁃ＲáｅｚＪＡ，Ａｚｃóｎ⁃ＡｇｕｉｌａｒＣ，Ｇａｒｃíａ⁃ＧａｒｒｉｄｏＪＭ．Ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓａｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒｓｏｆｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｓｉｇｎａｌｓｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ［２３］　许智宏．植物激素作用的分子机理．上海：上海科学技术出版社，２０１２．

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｅｓ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２０１５，２０５（４）：１４３１⁃１４３６．

ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｅｓｄｅｐｅｎｄｓｏｎｔｈｅｐａｒｔｎｅｒｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｃｏｌｏｇｙ，２０１４，４０（７）：７９１⁃８０３．Ｅｃｏｌｏｇｙ，２０１２，３８（６）：６５１⁃６６４．

ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｆｏｌｉａｒｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，２０１１，３４９（１／２）：３６７⁃３７６．

２０１０，２０（７）：４９７⁃５０４．

［２４］　ＢａｌｌａｒéＣＬ．Ｊａｓｍｏｎａｔｅ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｄｅｆｅｎｓｅｓ：ａｔａｌｅｏｆｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｓａｎｄｒａｓｃａｌｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，１６（５）：２４９⁃２５７．

１７⁃２４．

［２５］　宋云，李林宣，卓凤萍，张雪妍，任茂智，李付广．茉莉酸信号传导在植物抗逆性方面研究进展．中国农业科技导报，２０１５，１７（２）：［２６］　ＶｉｊａｙａｎＰ，ＳｈｏｃｋｅｙＪ，ＬéｖｅｓｑｕｅＣＡ，ＣｏｏｋＲＪ，ＢｒｏｗｓｅＪ．ＡｒｏｌｅｆｏｒｊａｓｍｏｎａｔｅｉｎｐａｔｈｏｇｅｎｄｅｆｅｎｓｅｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ［２７］　ＫｏｏＡＪＫ，ＨｏｗｅＧＡ．Ｔｈｅｗｏｕｎｄｈｏｒｍｏｎｅｊａｓｍｏｎａｔｅ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００９，７０（１３／１４）：１５７１⁃１５８０．

ＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９９８，９５（１２）：７２０９⁃７２１４．

［２８］　ＢｒｏｗｓｅＪ．Ｊａｓｍｏｎａｔｅｐａｓｓｅｓｍｕｓｔｅｒ：ａｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｔｈｅｄｅｆｅｎｓｅｈｏｒｍｏｎｅ．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００９，６０：１８３⁃２０５．

２００２，１３０（３）：１２１３⁃１２２０．

［２９］　ＨａｕｓｅＢ，ＭａｉｅｒＷ，ＭｉｅｒｓｃｈＯ，ＫｒａｍｅｌｌＲ，ＳｔｒａｃｋＤ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｊａｓｍｏｎａｔｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｂａｒｌｅｙｒｏｏｔｓ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，［３０］　赵诗阳，朱颖，刘金洋，郝林．茉莉酸介导丛枝菌根形成及其诱导抗病性研究进展．生物技术，２０１５，２５（５）：５０５⁃５１０．

ａｎｄｊａｓｍｏｎａｔｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２０１６，２１１（３）：１０６５⁃１０７６．

［３１］　ＣｏｓｍｅＭ，ＬｕＪ，ＥｒｂＭ，ＳｔｏｕｔＭＪ，ＦｒａｎｋｅｎＰ，ＷｕｒｓｔＳ．Ａｆｕｎｇａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｈｅｌｐｓｐｌａｎｔｓｔｏｔｏｌｅｒａｔｅｒｏｏｔｈｅｒｂｉｖｏｒｙｔｈｒｏｕｇｈｃｈａｎｇｅｓｉｎｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ［３２］　Ｒｕｉｚ⁃ＬｏｚａｎｏＪＭ，ＡｒｏｃａＲ，ＺａｍａｒｒｅñｏÁＭ，ＭｏｌｉｎａＳ，Ａｎｄｒｅｏ⁃ＪｉｍéｎｅｚＢ，ＰｏｒｃｅｌＲ，Ｇａｒｃíａ⁃ＭｉｎａＪＭ，Ｒｕｙｔｅｒ⁃ＳｐｉｒａＣ，Ｌóｐｅｚ⁃ＲáｅｚＪＡ．

ａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２０１６，３９（２）：４４１⁃４５２．

Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｓｓｔｒｉｇｏｌａｃｔｏｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｕｎｄｅｒｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｄｒｏｕｇｈｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｌｅｔｔｕｃｅａｎｄｔｏｍａｔｏ．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ

［３３］　ＫｏｓｋｅＲＥ，ＧｅｍｍａＪＮ．ＡｍｏｄｉｆｉｅｄｐｒｏｃｅｄｕｒｅｆｏｒｓｔａｉｎｉｎｇｒｏｏｔｓｔｏｄｅｔｅｃｔＶＡｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ．ＭｙｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８９，９２（４）：４８６⁃４８８．

（１）：６３⁃６７．

［３４］　ＢｉｅｒｍａｎｎＢ，ＬｉｎｄｅｒｍａｎＲＧ．Ｑｕａｎｔｉｆｙｉｎｇｖｅｓｉｃｕｌａｒ⁃ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ：ａｐｒｏｐｏｓｅｄｍｅｔｈｏｄｔｏｗａｒｄｓｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，１９８１，８７［３５］　ＪｉａｎｇＹＮ，ＷａｎｇＷＸ，ＸｉｅＱＪ，ＬｉｕＮ，ＬｉｕＬＸ，ＷａｎｇＤＰ，ＺｈａｎｇＸＷ，ＹａｎｇＣ，ＣｈｅｎＸＹ，ＴａｎｇＤＺ，ＷａｎｇＥＴ．Ｐｌａｎｔｓｔｒａｎｓｆｅｒｌｉｐｉｄｓｔｏ［３６］　尚春明，高振江，李秀华，高娃，王亮明，姚慧静．番茄早疫病抗性材料的苗期接种鉴定．北方园艺，２０１８，（１４）：１⁃５．

１００⁃１０４．

ｓｕｓｔａｉｎｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｂｙｍｕｔｕａｌｉｓｔｉｃｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌａｎｄｐａｒａｓｉｔｉｃｆｕｎｇｉ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１７，３５６（６３４３）：１１７２⁃１１７５．

［３７］　袁庆华，桂枝，张文淑．苜蓿抗感褐斑病品种内超氧化物歧化酶、过氧化物酶和多酚氧化酶活性的比较．草业学报，２００２，１１（２）：［３８］　朱广廉，钟海文．植物生理学实验．北京：北京大学出版社，１９９０．

［３９］　姚锋先，曾晓春，蒋海燕，方加海，吴晓玉．水稻中以亚麻酸为底物的脂氧合酶活性测定．江西农业大学学报，２００６，２８（２）：１８３⁃１８６．［４０］　段倩倩，杨晓红，黄先智．植物与丛枝菌根真菌在共生早期的信号交流．微生物学报，２０１５，５５（７）：８１９⁃８２５．

［４１］　ＺａｍｉｏｕｄｉｓＣ，ＰｉｅｔｅｒｓｅＣＭＪ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｏｓｔｉｍｍｕｎｉｔｙｂｙｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｍｉｃｒｏｂｅｓ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ⁃ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２０１２，２５（２）：１３９⁃１５０．

ａｇａｉｎｓｔＡｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ．ＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１５，１７（３）：６２５⁃６３１．

［４２］　ＮａｉｒＡ，ＫｏｌｅｔＳＰ，ＴｈｕｌａｓｉｒａｍＨＶ，ＢｈａｒｇａｖａＳ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｉｎｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｔｏｍａｔｏｐｌａｎｔｓａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［４３］　Ｔｅｊｅｄａ⁃ＳａｒｔｏｒｉｕｓＭ，ＤｅｌａＶｅｇａＯＭ，Ｄéｌａｎｏ⁃ＦｒｉｅｒＪＤ．Ｊａｓｍｏｎｉｃａｃｉｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｏｍａｔｏｐｌａｎｔｓｂｙｍｏｄｉｆｙｉｎｇｔｈｅ［４４］　温小杰，张学勇，郝晨阳，蒲文，刘旭．植物激素信号传导途径研究进展．中国农业科技导报，２０１０，１２（６）：１０⁃１７．［４５］　刘润进，唐明，陈应龙．菌根真菌与植物抗逆性研究进展．菌物研究，２０１７，１５（１）：７０⁃８８．

ｔｈａｌｉａｎａ．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２００３，３４（３）：３５１⁃３６２．

［４６］　Ｃａñｏ⁃ＤｅｌｇａｄｏＡ，ＰｅｎｆｉｅｌｄＳ，ＳｍｉｔｈＣ，ＣａｔｌｅｙＭ，ＢｅｖａｎＭ．ＲｅｄｕｃｅｄｃｅｌｌｕｌｏｓｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｖｏｋｅｓｌｉｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［４７］　ＳｏｎｇＹＹ，ＹｅＭ，ＬｉＣＹ，ＷａｎｇＲＬ，ＷｅｉＸＣ，ＬｕｏＳＭ，ＺｅｎｇＲＳ．Ｐｒｉｍｉｎｇｏｆａｎｔｉ⁃ｈｅｒｂｉｖｏｒｅｄｅｆｅｎｓｅｉｎｔｏｍａｔｏｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ［４８］　ＦｅｓｔｅｒＴ，ＨａｕｓｅＧ．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｒｏｏｔｓ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２００５，１５（５）：３７３⁃３７９．

Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１５，６：７８６．

ａｎｄｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｊａｓｍｏｎａｔｅｐａｔｈｗａｙ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｃｏｌｏｇｙ，２０１３，３９（７）：１０３６⁃１０４４．ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉａＰｌａｎｔａｒｕｍ，２００８，１３３（２）：３３９⁃３５３．

［４９］　ＳｏｎｇＹＹ，ＣｈｅｎＤＭ，ＬｕＫ，ＳｕｎＺＸ，ＺｅｎｇＲＳ．Ｅｎｈａｎｃｅｄｔｏｍａｔｏｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｉｍｅｄｂｙａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｌａｎｔ

ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｃｏｌｏｇｉｃａ．ｃｎ