色谱复习题

HPLC仪器使用注意问题 泵的操作注意问题

• 1、防止固体微粒进入泵体 • 2、流动相不含腐蚀性物质 • 缓冲液防盐析出 • 3、防空泵运转

• 4、使用压力不超标 • 5、流动相应先脱气 故障排除

• 1、无流动相流出，又无压力指标 • 应排气或换密封环 • 2、压力和流量不稳

• 排气泡或清洗相关部件 • 3、压力过高或过低

• 过高：管路堵塞；清洗 • 过低：管路泄漏 检测器: 安培检测器

流动相必须能导电 加支持电解质 蒸发光检测器

流动相必须具挥发性，且不含缓冲盐类

示差折光检测器

原理：通过连续测定色谱柱流出液折射率的变化而对样品浓度进行检测。 不能做梯度实验 化学键合相色谱

• 将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相 优： 固定液不易 流失 化学性能 稳定 热稳定好(70℃) 选择性好

利于梯度洗脱 键合相的类型

非极性键合相：烷烃类YQG-C18H37 YWG-C18H37

极性键合相：氰基、氨基、二醇基 YWG-CN 中等极性 YQG-NH2强极性

化学键合相色谱法的分离条件选择 固定相选择

中等极性和极性较强-------极性键合相

如氰基键合相：用于分离双键异构体

氨基键合相：用于分离 糖类、强心甙 二醇基键合相：用于分离有机酸、蛋白质

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非极性或极性弱的化合物-------非极性键合相 流动相选择

• 正相：烷烃 + 适宜极性调整剂

• 反相：水+与水相溶的极性调整剂(甲醇\\乙腈) • 三、其它条件的选择

• pH 2-8 保持键合相的稳定性 • 反相：分离弱酸（3≤pKa≤7)

• pH < pKa 流动相中加少量酸性缓冲液 • 分离弱碱（7≤pKa≤8） PH > pKa HPLC对流动相的基本要求

1．不与固定相发生化学反应

2．对试样有适宜的溶解度,使k在 1-10范围内 3．与检测器相适应

4．纯度高, 粘度小 问答题:

1、色谱流出曲线图能说明哪些问题?

2.根据Van Deemter议程式, HPLC提高柱效的方法有哪些?或 HPLC法降低板高的主要途径有哪些？

3.什么是正相色谱?什么是反相色谱?HPLC常用反相色谱,它最常用的固定相和流动相是什么?

4. 一个好的检测器应具备什么条件?HPLC中可使用的检测器有哪些?你在实验中用过哪些检测器,它们有何特点(包括使用中应注意的问题, 适用于何种物质的检测)?属于哪种类型?

5.流动相和分析液都不能有气泡,为什么?常用的除气方法有哪些? 流动相和分析液都不能有不溶物,为什么?如何处理? 6．HPLC对流动相有哪些要求？

7 ODS是什么?如何制成的，有何特点?

8用ODS柱分析试样中两种弱酸性物质(pKa可能在2-5范围内),以一定比例的甲醇-水或乙腈-水为流动相时,保留时间短,分离度差,应如何改变流动相以改善分离度？ 9毛细管电泳CE的驱动力、分离机理与HPLC有何不同？CE的柱效为何高于HPLC？ 10 电渗速度受哪些因素响?

11、PHCE影响分离度的主要因素有哪些?

12 电渗流是如何产生的？为什么说毛细管电泳的流型是“塞子”状的平面流型？它有什么优点？

13 你认为对紫外没有吸收或吸收太少的样品，用HPLC检测该如何处理？ 14 手性药物的拆分你可用什么方法？ 15 影响R的因素？

16 定性、定量分析（归一、内标、叠加）方法有哪些，各适用于何种分析？ 17 n, H, R, 淌度的计算。

18你认为现代色谱的发展方向是什么?应用前景如何?学习现代色谱课程你有哪些收获? 你认为该课程的开设有无必要?你认为该课程还应作哪些方面的改进?哪些内容你感兴趣?哪些内容要加强?哪些内容应精简? (此题非考试内容)

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