IAA测定方法

1.采样

取幼苗的芽用于测定

2.实验方法

取幼苗的芽用干净的清水冲洗后，除去其表面附着的微小生物和杂质，用吸水纸将海藻表面的水分吸干，称取两份各10g，将其中一份样品与2,6－二叔丁基－4－甲基苯酚（BHT，作为抗氧化剂）以及50mL 90% 甲醇溶液一起加入到组织破碎机中，破碎约2min。破碎液转移至锥形瓶中，再加50mL 90% 甲醇溶液，锥形瓶用塞子密封后置于暗室中的磁力搅拌器上于4℃ 搅拌，浸提4h。另外一份未经破碎的样品置于另一锥形瓶中，加入100mL 90% 甲醇溶液，用与上述同样的方法在暗室中4℃搅拌，浸提4h，获得提取液。

3.提取液的纯化分离过程

过滤浸提液滤渣用20mL甲醇洗后弃去滤渣，≦35℃减压浓缩至165mL水相。石油醚萃取3次（1:1），弃去石油醚，保留水相。调 pH8.0，正丁醇萃取3次（1:1），保留水相。调pH3，乙醚（0℃，CBHT=100mg/L）萃取3次，弃去乙醚相。保留水相并调pH3，乙醚（0℃，CBHT=100mg/L）萃取3次。乙醚减压蒸干用50%甲醇（0℃）1mL 洗出，加CBHT=100mg/L,过DEAE纤维素柱并用0.05mol/L,pH8.0 的缓冲液洗脱，CBHT=100mg/L.弃去水相，调pH3，乙醚（0℃，CBHT=100mg/L）萃取3次，乙醚相减压蒸干。获得的生长素提取物用于定量测定.

4.荧光分光光度法

其基本原理是在催化剂的作用下IAA与乙酸酐形成具有荧光的物

质，在特定的激发波长和发射波长条件下测定样品吸光值。吲哚－α－吡喃酮的最大激发波长为450nm，发射波长为480nm，但是为了避免高峰散射的影响，低浓度的测定选用最大激发波长为440nm，发射波长为490nm。在反应中止60s后用

850荧光分光光度计在选定波长下测定IAA含量。