免疫组织化学Image Pro Plus图像半定量分析的参数选择

ＣＨＩＮＥＳＥ　Ｊ０ＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＡＴＯＭＹ　Ｖｏ１．３５　Ｎｏ．１　２０１２　解剖学杂志２０１２年第３５卷第１期　免疫组织化学Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ图像半定量分析的参数选择　徐洪　杨方　。　袁媛　程华　魏中秋　李淑钰。　０６３０００）　（１河北医科大学基础医学院，石家庄０５００１１；２河北联合大学医学研究中心，唐山摘要　目的：应用Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ（ＩＰＰ）图像分析软件测算阳性细胞面积（ａｒｅａ）、平均光密度值、积分光密度值，研究面积参数　选择、阳性结果选色方式对免疫组织化学结果的影响，以期获得ＩＰＰ图像分析免疫组织化学的标准化结果。方法：采用人工计　数法将矽肺免疫组织化学结果分为低表达、中表达、高表达３组。应用ＩＰＰ软件，面积选择参数分为过滤１Ｏ、３０、５０、１００以　下的阳性显色；采用吸管取色、ＲＧＢ、ＨＩＳ　３种选择阳性显色的方法；编写宏文件，计算各组阳性细胞面积、平均光密度值　（ＭＤ）、积分光密度值（ＩＯＤ）的均值和总和，并与人工计数法测算结果进行比较。结果：在滤过面积１０￣１００范围内，面积参数　对各组阳性细胞面积总和、ＩＯＤ总和统计结果无影响，与人工计数法结果一致；采用ＨＩＳ选色测算的面积总和、ＩＯＤ总和与人　工计数法结果一致。结论：ＩＰＰ图像分析能够简易、快速地进行免疫组织化学结果的半定量分析，面积参数在一定范围内对测　算结果无影响，ＨＩＳ选色方式可能较吸管显色和ＲＧＢ选色方式好，而ＩＯＤ总和是比较可靠、稳定的半定量指标。　关键词　Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ图像分析；免疫组织化学　Ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｂｙ　Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ　ｉｍａｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｘｕ　Ｈｏｎｇ　，Ｙａｎｇ　Ｆａｎｇ　一，Ｙｕａｎ　Ｙｕａｎ２，Ｃｈｅｎｇ　Ｈｕａ２，Ｗｅｉ　Ｚｈｏｎｇｑｉｕ　，Ｌｉ　Ｓｈｕｙｕ　（１．Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，ＨｅｉｂｅｉＭｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ，０５００１１；２．ＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，　Ｈｅｉｂｅｉ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｎｇｓｈａｎ　０６３０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ａｒｅａ，ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｓｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ（ＩＰＰ）ｉｍａｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｏｆｔｗａｒｅ，ａｎｄ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ　ａｂｏｕｔ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅ—　ｓｕｌｔ　ｃｏｌｏｒ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｆｉｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｒｅｓｕｈ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｉｎ　ＩＰＰ　ｉｍａｇｅ　ａｎｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｉｌｉｃｏｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ（ｈｉｇｈ　ｅｘ－　ｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）ｂｙ　ｍａｎｕａｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．ＩＰＰ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ（ａｒｅａ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ：　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｂｅｌｏｗ　ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ　１０，３Ｏ，５Ｏ　ａｎｄ　１００）．Ｐｉｐｅｔｔｅ　ｓｈａｄｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ＲＧＢ　ａｎｄ　ＨＩＳ　ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ｐｏｓｉ—　ｔｉｖｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｃｏｍｐｉｌｅ　ｍａｃｒｏ　ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ　ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ａｎｄ　ｓｕｍ　ｏｆ　ｄａｔａ　ａｂｏｕｔ　ｔｈｅ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅ—　ｓｕｉｔｓ．Ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｂｙ　ｍａｎｕａｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｂｙ　ｍａｎｕａｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ。ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｌｔｅｒ　ａｒｅａ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１０　ｔｏ　１００，ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｐａｒａｍｅｔｅｒ　ｈａｄ　ｎｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｍ　ｏｆ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ＩＯＤ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　ｉｎ　ａｌ１　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｓｕｍｓ　ｏｆ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ＩＯＤ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　ｂｙ　ＨＩＳ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ａｌｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｂｙ　ｍａｎｕ—　ａｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＩＰＰ　ｉｍａｇｅ　ａｎｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃａｎ　ｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔｉｖｅｌｙ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ａｎ　ｅａｓｙ　ａｎｄ　ｆａｓｔ　ｗａｙ．Ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｐａｒａｍｅｔｅｒ　ｈａｓ　ｎｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｒａｎｇｅ．ＨＩＳ　ｍａｙ　ｂｅ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｐｉ－　ｐｅｔｔｅ　ｓｈａｄｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＲＧＢ．ＩＯＤ　ｉＳ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｒｅｄｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｓｅｍｉｑｕａｔｉｔｉｖｅ　ｉｎｄｅｘ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　近年来，越来越多的研究人员采用Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ　ｐｌｕｓ　（ＩＰＰ）图像分析软件进行免疫组织化学定量分析，研究　表明阳性细胞面积、平均光密度值（ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ，　在程序使用上各研究人员设定参数不统一，导致重复　性不好，无法获得一个标准化的结果。本研究采用人　工计数法将矽肺免疫组织化学结果分为低表达、中表　ＭＤ）、积分光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ，ＩＯＤ）　可以成为免疫组织化学结果半定量分析的有效指　标［】　］，而在实际应用中，因为受个人主观因素的影响，　达、高表达３组。应用ＩＰＰ软件，面积选择参数分为过　滤１Ｏ、３０、５０、１００以下的阳性显色；采用吸管取色、　ＲＧＢ、ＨＩＳ　３种选择阳性显色的方法；编写宏文件，计　算各组阳性细胞ａｒｅａ、ＭＤ、ＩＯＤ的总和（ｓｕｍ）和均值　国家自然科学基金（８１０７２２５４）；河北省自然科学基金（Ｃ２０１１４０１０２４）　第１作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｈｏｎｇ２０Ｏ２１９８＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ　△通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆａｎｇｙａｎｇ０２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ　（ｍｅａｎ），研究面积选择参数、选择阳性显色的方式对半　定量分析结果的影响，以及与人工计数方法的一致性、　重复性，以期获得一个比较简单、准确、标准化的免疫　组织化学半定量分析结果。　收稿日期：２０１１—０５—１０；修回日期：２０１１—１０—２８　３７—　１材料和方法　件下，过滤１０、３０、５０、１００以下的阳性显色，ａｒｅａ　（ｓｕｍ）、ＭＤ（ｓｕｍ）、ＩＯＤ（ｓｕｍ）随滤过面积的增加而减　１．１样本来源和人工计数分析　少，而面积参数对各组ａｒｅａ（ｓｕｍ）、ＩＯＤ（ｓｕｍ）统计结　果无影响，高、中、低３组两两比较差异均具有统计学　意义，而ＭＤ（ｓｕｍ）只有滤过面积达到１００后各组差异　收集课题组前期实验中矽肺免疫组织化学切片　若干张，选择标准：棕黄色颗粒特异性分布于胞质，显　色较好，非特异性背景显色控制良好。所有切片的观　察经３名病理科医师独立在光镜下完成，每人选择　１Ｏ个具有代表性的高倍视野（４００×），计数免疫组　织化学标记定位准确的阳性细胞占视野内细胞数的　比例并计分，标准为：胞质阳性细胞数占细胞总数的　２５　以下为（４－／一），２５　～５０　为（＋），５１　～　才有统计学意义；ａｒｅａ（ｍｅａｎ）、ＭＤ（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ　（ｍｅａｎ）随滤过面积的增加而增加，而面积参数对各组　ａｒｅａ（ｍｅａｎ）、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ（ｍｅａｎ）统计结　果无影响，高、中、低３组两两比较差异无统计学意义　（表１～３）。　２．３选色方式对ＩＰＰ图像分析结果的影响　７５　为（４－４－），７５　９／６以上为（４－４－４－），分别计分为　采用吸管和ＨＩＳ选色较为特异，而ＲＧＢ选色如果　１、２、３、４分；显色强度分别以（４－／一）、（４－）、　（４－４－）表示，分别计分为１、２、３分；将两者计分乘　积作为免疫组织化学显色结果。最终分为低表达（１～　４分）、中表达（５～８分）、高表达（９～１２分）３组，每组６　张切片。　１．２　图像采集与分析　采用图像采集系统将３组切片按照同一采集参数　拍摄，每张切片随机采集４００×图像６张。采用ＩＰＰ图　像分析软件（Ｖｅｒｓｉｏｎ　６．０，Ｍｅｄｉａ　Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ），打开１　张图片，Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ设定为Ｓｔｄ．Ｏｐｔｉｃａｌ　Ｄｅｎ—　ｓｉｔｙ，即测算结果均为光密度值（ｄｅｎｓｉｔｙ）。ｉ贝０量参数　（ｓｅｌｅｃｔ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）选择ａｒｅａ、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ＭＤ）、　ＩＯＤ，其中面积选择参数分为过滤１０、３０、５０、１００以　下的阳性显色，将参数设置保存（ｄａｔａ．ｅｎｖ）；选择阳性　结果（ｓｅｌｅｃｔ　ｃｏｌｏｒｓ），采用Ｃｏｌｏｒ　Ｃｕｂｅ　Ｂａｓｅｄ模式下的　吸管取色、Ｈｉｓｔｏｇｒａｍ　Ｂａｓｅｄ模式下的ＲＧＢ（Ｒ＝＝＝１８０；　Ｇ：１６０；Ｂ＿－１４０）和ＨＩＳ（Ｈ一６０；Ｉ一２５５；Ｓ一２５５）３　种选择阳性显色的方法，并将选色方案保存（ｒｇｂ２４．　ｒｇｅ）。编写宏文件：（１）设置宏文件名和快捷键；（２）打　开１张图片，载入测量参数文件（ｄａｔａ．ｅｎｖ）；（３）ｓｅｌｅｃｔ　ｃｏｌｏｒｓ，载人选择方案文件（ｒｇｂ２４．ｒｇｅ）；（４）计数　（ｃｏｕｎｔ）；（５）在结果一栏（ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）选择输出数据（ｅｘ—　ｐｏｒｔ　ｄａｔａ）；（６）删除现有数据（ｄｅｌｅｔｅ）；（７）结束编程。　打开其他图片，采用宏文件快捷键进行测算，数据被自　动输入Ｅｘｃｅｌ。　１．３统计学处理　用Ｅｘｃｅｌ建库，所有结果均以ｚ±Ｓ表示，用　ＳＰＳＳ１３．０软件进行方差分析。　２结果　２．１人工计数法测算　低、中、高３组人工计数分值分别为２．１７±０．９８、　６．３３±０．８２、１０．５０±１．６４，两两比较差异具有统计学　意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。　２．２　面积参数对ＩＰＰ图像分析结果的影响　在选色方式为ＨＩＳ（Ｈ一６Ｏ；Ｉ一１５５；ｓ一１５５）条　３８～　不使用吸管工具，单纯设定ＲＧＢ数值有可能造成非特　异性的选色，即发生将蓝色的核定义为阳性区域的错　误。在过滤面积为５０的情况下，仅有ＨＩＳ选色方式所　测得的面积总和、ＩＯＤ总和在高、中、低３组间差异均　有统计学意义，与人工计数法测算结果一致，而其他选　色方式、测算指标与人工计数法结果不完全一致（表　４～６）　３讨论　较于人工计数法，ＩＰＰ图像分析免疫组织化学结果　具有以下优点：（１）客观，采用统一标准进行结果判定，　人为干扰因素较小；（２）准确，计算机将图像色彩转化　为数值，且分辨率较人眼高，理论上测算结果更为准　确；（３）快速，编辑宏文件可以进行大批量的图像自动　测算；（４）简易，上手较快，较人工计数法更容易掌握，　因此ＩＰＰ图像分析软件日益受到研究人员的喜爱。但　是由于不同的研究人员对ＩＰＰ图像分析软件使用方法　的不同，以及软件本身只是单纯执行指令而无人脑分　析这一弊病，导致其应用受限。本研究参照以往研究　结果Ｅ　，选择面积、ＭＤ、ＩＯＤ作为ＩＰＰ图像软件的测　算结果，显示面积、积分光密度较于平均光密度更适合　作为测算结果使用。尤其是积分光密度，在ＩＰＰ中被　定义为每个阳性样本光密度值和面积乘积之和，相当　于光密度总和（ｓｕｍ　ｄｅｎｓｉｔｙ），这与通用的人工计数法　的显色强度和阳性细胞百分比乘积更为接近。　ＩＰＰ图像分析软件并不能自动去除非特异性显色，　如杂点，因此通常需要进行面积过滤。本研究分别滤　过１０、３０、５０、１００面积后，显示随着滤过面积的增加，　阳性样本数减少，相应导致ａｒｅａ（ｓｕｍ）、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ　（ｓｕｍ）、ＩＯＤ（ｓｕｍ）的减少，以及ａｒｅａ（ｍｅａｎ）、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ（ｍｅａｎ）的增加。值得注意的是，　ＩＰＰ软件最终给出的结果包含总和和均值两部分，研究　人员采用不一，余萍等＿１］采用的是ａｒｅａ（ｓｕｍ）、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ（ｓｕｍ），而张综宇等Ｅ。　采用的是　ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ（ｍｅａｎ），认为这些指标均能　有效地进行定量分析。本研究结果显示ａｒｅａ（ｓｕｍ）、　一ｑ　Ｈ　００＿【　罾蘸蛊一目ｐ旦　阻掣匿葭糕　旧Ｈ　爵ａＪＢ　Ｊ０∞８皇２ａ｜ａＪ　皇基　磊ＩＩ３四ａＪＢ　ａＡ　州锄ｏｄ　Ｊ０　８口ａｎ＿　ＩＩ　一　ｄ８苫　。∽．譬＿【州＿【。．　∞∞　．＇［￡Ｉ　．【＿【．　【＿∞．　Ｎ卜ｌ＋∞∞．ｏ＿【　＇【　昌．譬∽Ｎ　＝．　。∽　∞．　００。　譬．　∞∞譬　ｇ　．＿【∞寸　刊０　．＿【　＊９＇【．∽岛∞　０　．０∞＿【０＿【　∞．Ｎ∞＿【０　００．。　。Ｎ。　∞　．＿【＝州＇【ｈ．∞【ｚ　０　．【＿　．＇【０∞　詈．　①　Ｎ．Ｎ　．【　＿【．Ｈｈ　葛．Ｎ　．　ｌｚ　∞＿【．∞∞∞　。．【＿０∞　∞∞．。暑　０．０　譬∞．０．【　。刊０∞．∞　０Ｎ　＿【．∞０∞。Ｎ　譬．Ｎ∞０　。＿［．Ｎ∞刊　０．。高　Ｎ刊器．　∞０＿【。　【＿∞．∞∞∽　。∞．　卜　∞．　ｇ．０　．Ｎ＝　∞　．　０Ｈ刊兽．　．【　∞∞．　刊∞　．【＿　＿【　＊【　．∞０∞　葛．。２。　＿【．∞。　譬．∞∞　①．　０．【刊　．　Ｎ∞Ｎ　∞０．０　∞∞．０　０　．＿【　∞　．∞　＿【０．０　葛．０　【＇．　∞０．２　蓦．０　∞．０　ｈ．。　Ｎ．。＿【　一一霸２爵Ｊ０　ｓａ鳘【口８苫　０　兽．器　∞∞．∞∞０＿【　∞　．∞霉＿【　∞州　．∞０＿［　＿【．。０　Ｎ刊　．。譬　０．∞∞　Ｎ∞．＇【　０＿【　。　．∞　一　兽　譬一一叼　一再§Ｊｏ簦　Ⅱａ　ａ｜岛　０　０二［啦∞．０　．Ｎ州。　．　０　翁．０　ＮＮ．　刊∞卜．＿【　．０＿＋葛．０　竹∞．∞制　＇【．∞　兽醛譬　０Ｉ靛糕螭　阻Ｎ　Ｂ弓盆ｏＩ　Ｊｏ　ａ３—卜．Ｎ　０．　。　．譬０＿Ｎｈ．。Ｎ　。０．　∞．＇［∞　．。∞　∞∽．∞＿【　ｈ．Ｎ　０＿台　墨　ＩＩ嚣苫一　梅米　靛糕　ａｓ茸ｐａ誊弓自苫Ｊ０　ａ３葺笛Ｉ０∞　∞０．０刊墨．０　∞　．＿【０．０制　∞．０　．　＿∞０．０刊∞∞．０　∞　．０＿　Ｎ　　【＇　∞∞．＝　∞．。０．　＿【　∞　．【＇＿［　∞０　０＇【　｝∞０．　ｎ　ＪｕＩ　ｎ　．０＿【　Ｎ０．０　葛．∞∞　００．０　＿［Ｎ．葛　∞０．０　．３９一　　ａ　ａＪ４　眉　ａｓ雪甓鐾Ｉ蛩噶ⅡＩ∞∞．∞　．∞．Ｎ＝　　【　∞Ｎ．【【　∞　．．【∞旧∽０．＿［０．ｇ＿【　【　［∞【　＿【∞一∞　善　譬一ｇｖ）　墨茁懈恹脚　匣、上ｔ，　一　州　一譬ｌｎ∞　ａ＾善ｓｏ臣嚣ｌＩ＿芑　—ａｓ　０∞ｐｏ暑耋售　毒Ｉｐ　∞０　磬—嗣弓西§∞＾ｌ葛ｓ０臣Ｊｏ　８ＩＩ誊写ｕｌ　寸　鼻　矗０　ｕ　—　∞　口ｇ苫　０　０　∞　．＿【＿［＿【　＿【ｈ．　＿【Ｎ　０　．＇Ｅ０　．＇Ｅ０∞　０∞．＿［∽　Ｎ　０　．【＇　Ｎ　＊９－［．∞￡￡　刊０　．０∞＿［①Ｈ　＃　∽．Ｎ∞＿［９ｚ　００．　０　Ｎ∞　昌．．［　∞．　．Ｎ器　宝．　＿【　＿［ｈ．Ｎ∞０＝　∞∞．　＝　０．∞　∞０刊０　．∞　∞０．Ｎ　Ｎ．＿【　＝．∞０．∞ｏ　∞　．∞￡￡　罱．　．０∞①　∞０．［＿∞．∞∞∞　∞∞．∞０　∞∞．苗０　００．【＿　０　００．９９　譬刊０Ｎ．　＿【∞∞Ｎ＿【　Ｎ０．　００．０∞　∞０．∞　．∞∞　∞．Ｎ＝　昌兽．０　∞∞．＿［０．０　∽∞．０．０　４０　∽Ｈ｝｛　．∽∞０＿【　∞　．０∞０＿［　＊９＿［．口０　．０∞　∞　＃　∞．＿【　０＇【刊００．∞磊￡ｚ　．　刊　．０　Ｎ．０　∞　．＇【Ｎ　∞．∞　＇［．∞Ｎ　一目　一的　一嚣Ｉｎ的ａＪ譬葛ｓ０盘　ｕｌ＿ｇ＿∞０　ｄ８害　＝．∞＿【　．０　∞．∞Ｎ刊＿【　．　＿【　．Ｎ０　刊兽．９ｚ　＃　—Ｈ　一兽蘸窖一鲁∞Ｉ【ｓ州　一兽ＩＩｌ罄　雪＿！誉ｌｄ警岬＿　∞０　ｄｇ苫　兽．０　＿［　０　０．０　导．０　０．０　∽　．０　匣　Ｉ善一苫譬　黾茸ｐａ　蜀ＢＩＩ　＾＿０一Ｊ０　８ｕａ喜写ｕＩ　０　ｕ　一　∞　０　⑦　∞．０∞．【∞　０　．ＮＮ　０　．　∞　０∞　刊　．∞００　∞　＿【　．０∞　譬．⑦０　Ｎ∞Ｎ譬　∞０．ｇ０　Ｎ∞．∞∞＿【　０　．⑦　　§窆一世龆米曩　葭幅恹叫螋匣　０∞　宴互Ｊｌ苫童Ｉｐ壹甓鐾　莒自苫　０　詈矗ｕｌ　口。　ｕ　一　０．Ｎ＿［　０　．Ｎ∞　１［０．０刊０∽．０　￡８．∞　∞Ｎ．器　００．０刊０Ｎ．０　∞０．∞　．譬　＿［０．０　０∞．０　０　工ｄ　器　．∞０　一唇　髻　ｏＩ靛　　Ｊｏ们ｐｏＩ∞∞　盆０∞．＿［　．口　．　＃　．∞０Ｎ　＿【．０１【．９ｚ０Ｉｓ∞　基　ｌ０　０　．０　∽ｕ　ｕ　兽０　∽∞　ＩＯＤ（ｓｕｍ）在滤过面积１０～１００范围内，各组统计结果　与人工计数法一致，且不受滤过面积的影响，而ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｓｕｍ）只有当滤过面积达到１００后方与人工计　数保持一致。本研究中ａｒｅａ（ｍｅａｎ）、ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ　（ｍｅａｎ）、ＩＯＤ（Ｍｅａｎ）￣１］算结果无论滤过面积的变化，与　色度；Ｉ代表灰度；Ｓ代表饱和度）选色条件下，不考虑颜　色的问题，只考虑色度即整体亮度，因此选色较为特　异。本研究中ＨＩＳ选色条件下ａｒｅａ（ｓｕｍ）、ＩＯＤ（ｓｕｍ）　与人工计数法测算结果一致，其他选色方案并没有取　得满意的结果，考虑与标准差和选色不准确有关。　综上所述，ＩＰＰ图像分析能够简易、快速地进行免　疫组织化学结果的半定量分析，面积参数在一定范围　内对测算结果的统计学分析无影响，ＨＩＳ选色方式可　人工计数法测算结果并不一致，同时考虑到ＩＰＰ图像　分析中的阳性样本数并不代表实际上的阳性样本数，　因此不建议使用ｍｅａｎ作为免疫组织化学分析结果，同　时ｍｅａｎ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ｓｕｍ）在本研究中也显示出与人工计　数法的不一致性。综合考虑ＩＯＤ（ｓｕｍ）应该是较为合　适的ＩＰＰ图像分析指标之一。　选取阳性显色是ＩＰＰ图像分析中的关键，也是保　持分析一致性和可靠性的关键。采用Ｃｏｌｏｒ　Ｃｕｂｅ　能较吸管显色和ＲＧＢ选色方式好。综合考虑ＩＯＤ　（ｓｕｍ）是比较可靠、稳定的半定量指标。　参考文献　［１］余萍，步宏，王华，等．免疫组化结果的图像分析与人工计数方法　的对比研究ＥＪ］．生物医学工程学杂志，２００３，２０（２）：２８８—２９０．　［２］Ｗａｎｇ　Ｃ　Ｊ，Ｚｈｏｕ　Ｚ　Ｇ，Ｈｏｌｍｑｖｉｓｔ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ｉｍａｇｅ　Ｐｒｏ－Ｐｌｕｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｓｕａｌ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　Ｂａｓｅｄ模式下的吸管取色比较简单、方便，但是主观因　素较强；Ｈｉｓｔｏｇｒａｍ　Ｂａｓｅｄ模式下的ＲＧＢ（Ｒ代表红　色；Ｇ代表绿色；Ｂ代表蓝色）选色，其原理是红、绿、黄　３色按不同比例合成为混合色。而免疫组织化学中的　［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ　Ｍｏｌ　Ｍｏｒｐｈｏｌ，２００９，１７（６）：　５３０—５３５．　棕黄色在ＲＧＢ模式下必须是红、绿色值均大于蓝色，　且差别越大，阳性色彩越强［４］。在ＩＰＰ图像分析软件　实际操作中，比较容易出现蓝色的核也被计入阳性显　色的情况，本研究选择Ｒ一１８０、Ｇ一１６０、Ｂ一１４０参数　［３］张绘宇，张雅洁．非小细胞肺癌生物学特性免疫组化图像定量分　析ＥＪ］．中国体视学与图像分析，２００６，１１（２）：７７—７９．　［４］孙立新，宋立刚，宋志杰，等．肺鳞癌免疫组化彩色图像定量分析　ＥＪ］．中国肺癌杂志，２００１，４（３）：２１６—２１８．　（编辑：冀凯宏）　条件下，出现了这种非特异的情况。而在ＨＩＳ（Ｈ代表　解剖学杂志２０１２年第３５卷第１期　组织工程化心传导束的初步构建　李晓童　张喜张传森△　杨向群李玉泉　（第二军医大学人体解剖学教研室上海２００４３３）　房室传导阻滞是临床上常见的心律失常疾病，电子起搏器　胞生存活力高，Ｈ—Ｅ染色检测显示细胞在支架上生长良好，利用　有其固有的弊端。利用传导束细胞和支架材料在体外构建组织　工程化传导束，将之移植到心脏中修复或再建心传导通路应为　房室传导阻滞疾病治疗的理想方案。　本研究在分离、培养、鉴定大鼠胎胚心脏祖细胞的基础上，　将其与胶原海绵支架材料复合，体外构建组织工程化心脏传导　ＭＰＡ多通道电生理仪检测该组织工程化构建物传导速度为　０．２５～３．０　ｍ／ｓ，与在体心脏传导组织传导速度接近。初步结果　表明，将大鼠胚胎心脏祖细胞种植到胶原海绵支架上，可形成类　似在体心传导组织的组织工程化构建物。进一步的工作尚在进　行之中。　（编辑：叶文）　束。结果显示，细胞种植到支架上２周后，ＣＣＫ８法检测显示细　国家自然科学基金（３０９７０７３７、８１０７１６０３）；上海自然科学基金　（０９ＪＣ１４１７７００、Ｏ９ＺＲ１４３９３ＯＯ）　第１作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｘｔ１９８９１３０＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ　△通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｕａｎｓｅｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ　收稿日期：２０１１—１２—１６　４１－－－——