兽医临床上胶体金检测常见问题的分析

检疫检验　兽医临床上胶体金检测常见问题的分析　刘中成（哈尔滨市兽药饲料监察所１５００７０）　胶体金是常用的标记技术，以胶体金作为示踪　标志物应用于抗原、抗体的新型免疫标记技术，有其　独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。　在兽因临床使用的免疫印迹技术几乎都使用了胶体　金标记，但经常会遇到一些问题，现将其分析介绍如　下。　・　宠物医师应结合临床症状及其他生理指标作出综合　评价。　在抗体夹心法免疫检测中，有的抗体会与动物　血清出现阳性反应现象，因此当检测样品带有血液　时，无论犬只是否感染细小病毒，试纸都会出现阳性　反应。　１　Ｔｅｓｔ线处颜色深浅对结果的影响　在测定过程中，线条颜色的深浅与样品中单位　体积内病毒含量有关，单位体积内病毒含量越多与　４诊断试纸结果判定可能遇到的若干问题　若犬、猫发病处于潜伏期时，排泄的病毒量可能　较少，相应采样的病毒数量较少。在反应开始的３～５　其结合的金标抗体呈正比，Ｔ线的颜色偏红，但不同　厂家在产品的设计中的单位指标（包被胶体金抗体　的浓度、ＮＣ膜孔径的大小、封闭剂的选择等）是不一　样的，所以，不要过分纠缠颜色深浅，阳性线条出现　才是最终结论。　分钟时Ｔ线可能呈现较淡，到ｌ０分钟反应结束后，　线条会呈现的相对清晰。　若反应结束１小时后，Ｔ线处再有线出现，这是　胶体金倒流现象造成“回线”现象，硝酸纤维膜具有　双向的毛细渗透作用，若滴加检测样品量过多，膜在　湿润的状况下，可能出现渗透现象，而试纸ＣＷ线处　有肉眼见不到的痕迹，若胶体金沉落，便会呈现红色　线条，该结果无效。　“检测中Ｔ线消失”现象，主要是样品中病毒浓　度过高，当病毒浓度过高，在Ｔ处先形成的夹心免疫　抗原抗体复合物被游离的病毒竞争性结合，失去相　应的结合位点，从而出现的红色线条逐渐变浅，甚至　消失。　２提高犬瘟热病毒诊断试纸检出率的方法　犬瘟热临床分为呼吸道型、神经型、胃肠道型、　混合型４种。犬瘟热病毒感染早期，分泌物中病毒含　量较少，且犬瘟热病毒在空气中容易失活，采拭样本　存在人为误差，单检分泌物容易漏检。　建议采用口、鼻、眼多点多次采样充分混匀；胃　肠道型的犬瘟容易被忽视，可以采集犬粪便或肛门　腺分泌物为取样样本；犬瘟热病毒感染前期血液中　已有病毒繁殖，采血分离血清，进行检测得到的结果　更加准确。如果离心血清不便，也可直接采１－２滴全　血加到已采集分泌物的稀释液中，混匀后即可加样　检测。　“检测中Ｃ线消失”现象，可能患犬经过单克隆　抗体的治疗，而目前单克隆抗体基本以鼠源为载体，　而胶体金ｃ线处包被的二抗也为鼠源二抗；或者，犬　食入了被鼠污染的食物也会造成患犬体内产生免疫　抗体，从而出现Ｃ线消失的现象。　使用不同品牌试纸检测同１份样品，结果不一　致。主要是选择的单克隆抗体位点不同造成的微小　差异，ＣＤＶ仅１个血清型，目前流行毒株较多；ＣＰＶ　有２个血清型，目前流行ＣＰＶ一２型；不同地区流行的　毒株有可能存在病毒抗原飘移，出现检测结果差异。　导致“白板”现象的原因可能有。滴加样品量过　３试纸检测的可靠性　患犬发病初期可通过粪便排出大量细小病毒，　病毒粒子散在，传染性也较强。发病后期由于肠黏膜　分泌的ＩｇＡ抗体和随血进人肠道中的ＩｇＭ抗体增　多，病毒被抗体中和并相互凝集，此时若用试纸检测　可能会测不到病毒。　另外，在临床中对发生呕吐、腹泻、脱水等肠炎　综合症病犬，要进行物理性的鉴别工作。犬感染细　小、冠状、轮状等病毒，均呈现类似的临床症状，鉴别　诊断工作便很重要。某些细菌、寄生虫（球虫）或急　性胰腺炎，甚至异物均可导致犬出现腹泻便血。所　以，肠道出血的病例不仅仅是由于犬细小病毒引起，　多（≥５滴），同时滴加的速度过快；样品的ｐＨ值偏酸　或偏碱，导致胶体金结合异常；试纸保存不当，试纸　室温下保存即可，若存于　℃冰箱，使用前应置于室　温，待恢复到室温方可使　『；试纸取出后，应尽快进　行检测，检测区不能沾湿。　调　养殖技术顾问２０１０．３